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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR无果，求助各位大神
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长大的小鱼93

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by flhua at 2017-10-09 21:09:06
基因组用纯水稀释10或100倍试试，基因组中残留酚氯仿影响pcr

我提的基因组浓度为147ng/ul，50ul的体系我之前加的1ul，这样浓度会偏高吗？还是我提的基因组浓度太低？
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11楼2017-10-10 14:54:59
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长大的小鱼93

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by luckydog52 at 2017-10-10 12:06:33
这问题我也遇到过，稀释之后确实扩出来了
...

请问你提的基因组浓度有多少啊？我的基因组浓度147ng/ul
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12楼2017-10-10 14:56:22
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom
一般我都稀释成终浓度10-50，25ul体系加1ul，或者把题好基因组烘干，再用纯水溶解做模版，或者用培养好菌液做个菌液pcr扩增一个小片段试试，确认目标基因在基因组上

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只要有梦想，坚持就一定能实现
13楼2017-10-10 15:06:47
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长大的小鱼93

新虫 (小有名气)
谢谢大家！今天把基因组稀释了10倍和100倍，用Ex Taq酶和primer STAR酶均可以P出条带，万里长征总算迈出一小步了，谢谢大家的指导。
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14楼2017-10-10 21:04:35
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by egexig at 2017-10-10 10:04:04
我也有一段目的基因，用基因组作为模板怎么都行不通，换了好多引物都不行。相同基因其他位点都p出来了。
楼主最后解决了没？

既然知道了目的基因序列，你就多提一点基因组，可以试试直接双酶切以后得到你的序列，然后纯化一下，重新pcr，或者双酶切后克隆至载体上，在pcr
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15楼2017-10-11 08:46:49
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luckydog52

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 长大的小鱼93 at 2017-10-10 14:56:22
请问你提的基因组浓度有多少啊？我的基因组浓度147ng/ul...

忘了，这个不是模板浓度的事。是你提DNA时候的残余杂志对你的酶的影响。

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自信源于一次次成功的积累
16楼2017-10-11 10:04:21
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