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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR无果，求助各位大神
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长大的小鱼93

新虫 (小有名气)

[求助] 以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR无果，求助各位大神 已有4人参与

筛选到一株含有目的酶的菌株，使用NCBI查找到目的酶的基因，以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR均未果。期间重新设计过引物，进行过梯度PCR但都没有结果，且每次跑胶结果都特别干净，没有任何条带。实验新手一枚，现在请问各位大神有没有遇到过这种情况？是不是可以用Taq酶进行一下PCR，但我是要PCR获得目的基因送测序，怕Taq酶保真性不高有突变。希望大家可以给出一些建议，一些我可以继续的尝试，谢谢大家了!
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1楼 2017-10-09 20:24:08
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-11 07:44:35
primerstar扩增不出来，是因为它具有将你的引物或者模板讲解的 可能性，而普通的Taq酶没有， 所以Taq酶能扩出来的，primerstar不一定能扩出来,而热启动Taq聚合酶扩增性能很好，不会出现primerstar的 情况而且大于普通酶的 灵敏度和特异性，值得 一试。如果扩增片段大于15kb的话，推荐长扩增聚合酶，下游实验对精确度要求很高的话，建议使用 具有 保真性的高保真酶。
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长大的小鱼93
及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-10-09 21:17:05
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom
基因组用纯水稀释10或100倍试试，基因组中残留酚氯仿影响pcr

发自小木虫IOS客户端
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

长大的小鱼93 长大的小鱼93
只要有梦想，坚持就一定能实现
2楼2017-10-09 21:09:06
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长大的小鱼93

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by flhua at 2017-10-09 21:09:06
基因组用纯水稀释10或100倍试试，基因组中残留酚氯仿影响pcr

好的，谢谢建议，明天试试
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4楼2017-10-09 21:52:30
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长大的小鱼93

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-10-09 21:17:05
primerstar扩增不出来，是因为它具有将你的引物或者模板讲解的 可能性，而普通的Taq酶没有， 所以Taq酶能扩出来的，primerstar不一定能扩出来,而热启动Taq聚合酶扩增性能很好，不会出现primerstar的 情况而且大于普 ...

谢谢，请问primerstar可以将引物或是模板降解还是第一次听说，可以具体解释一下吗，万分感谢；会试一试用taq酶进行PCR，日后有问题还请多多指教，谢谢！
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5楼2017-10-09 21:57:47
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