[交流] q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！

5楼: Originally posted by 笑纳人生 at 2017-09-29 21:36:58
我之前也是老是出现这种问题，做了很多无用功，后来发现是引物的问题，引物买来之后没有保存好，每次扩增出来都是乱七八糟的，重新合成了引物之后就没有问题了，祝好

3楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-09-25 10:04:19
先做个NTC(无模板对照），如果还是出现非特异性扩增，检查试剂是否污染，若污染则是引物设计的问题，祝好！

5楼: Originally posted by 笑纳人生 at 2017-09-29 21:36:58
我之前也是老是出现这种问题，做了很多无用功，后来发现是引物的问题，引物买来之后没有保存好，每次扩增出来都是乱七八糟的，重新合成了引物之后就没有问题了，祝好

8楼: Originally posted by vege的桌子 at 2017-09-30 12:51:11
引物的问题比较大，导致扩增效率不够，环境也可能存在污染（CT值才在20几梯度就拉不开了），你的片段是多长的？最好小于150bp

10楼: Originally posted by vivianhu0123 at 2017-10-14 03:54:32
关于退火温度，BLAST上给的只是参考值，建议你做一个gradient PCR 去确定合适的退火温度 建议55-65
关于标准曲线，从参数上看beta还行，只是R2有点低，一般在0.99左右最好。而fyn1建议重做，或者看看是否有multipl ...

3楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-09-25 10:04:19
先做个NTC(无模板对照），如果还是出现非特异性扩增，检查试剂是否污染，若污染则是引物设计的问题，祝好！

13楼: Originally posted by 暖暖的太阳花 at 2017-10-18 22:36:44
请问无模板对照什么意思，不加模板的话不就没有峰了吗，谢谢
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14楼: Originally posted by vivianhu0123 at 2017-10-19 01:46:53
就是要看看有没有峰，理论上是没有峰，如果你的试剂污染就会出现峰，那就要换试剂了。...

7楼: Originally posted by cifer1230 at 2017-09-30 09:12:17
你说的引物没有保存好，是什么意思？我的引物就是放在-20℃，别的还需要怎样，我最近也在重新设计引物，都不知道咋整了？...

16楼: Originally posted by ychmax at 2018-01-19 15:33:54
看你的溶解曲线觉得是引物问题，建议换引物，可以去primerbank 有现成的

18楼: Originally posted by cifer1230 at 2018-01-19 15:37:29
我的是大鼠，primerbank里面只有人和小鼠的
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19楼: Originally posted by ychmax at 2018-01-19 15:55:53
那就重新设计吧，一般设计好的引物，我都选择退货温，用仪器自带去跑都没问题。同时你用的试剂质量很重要，最好是进口的
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