应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！
51/1返回列表
查看: 5875  |  回复: 23
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cifer1230

金虫 (著名写手)

[交流] q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！

我普通pcr摸出条带的，做q的时候退火温度也总是不合适，一次次的摸，结果都不太好，总有引物二聚体，我都不知道退火温度咋整了，试着从引物合成报告上减3-5度，也试过用从NCBI上blast的退火温度，都没有好的结果，乱七八糟的，因为刚刚接触，我认为这样盲做也不是办法，想请教下大家。
以下是我最近做的实验，我都快崩溃了，求帮帮忙。
我的引物是生工合成的，纯化程度是ULTRAPAGE
BETA:退火温度分别是，53.4，54.6. BLAST结果是：57
fyn:退火温度分别是55.56,55.75.BLAST结果是：60
这次的实验用的温度是blast的退火温度，结果如下，惨不忍睹。
求各位有经验者指出我的问题，我将不胜感激。
还有我做的是两个引物的标准曲线

q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！
AMPLIFICATION.png


q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！-1
CMD.png


q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！-2
MELT CURVE.png


q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！-3
STANDARD CURVE.png


q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！-4
标准曲线.png


q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！-5
程序.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2017-09-25 09:12:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

取个什么名啊

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你这有引物二聚体  重新设计引物吧
赞一下 回复此楼
23楼2018-01-30 11:38:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

山还在那儿

银虫 (小有名气)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
先做个NTC(无模板对照），如果还是出现非特异性扩增，检查试剂是否污染，若污染则是引物设计的问题，祝好！
赞一下 回复此楼
3楼2017-09-25 10:04:19
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-09-25 10:04:19
先做个NTC(无模板对照），如果还是出现非特异性扩增，检查试剂是否污染，若污染则是引物设计的问题，祝好！

嗯嗯
回复此楼
4楼2017-09-25 10:49:43
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑纳人生

新虫 (初入文坛)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
我之前也是老是出现这种问题，做了很多无用功，后来发现是引物的问题，引物买来之后没有保存好，每次扩增出来都是乱七八糟的，重新合成了引物之后就没有问题了，祝好
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2017-09-29 21:36:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
朝都2楼
2017-09-25 09:22   回复  
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
好 发自小木虫Android客户端
查看全部 24 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭