24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4011)
>文献求助 (413)
>虫友互识 (346)
>导师招生 (331)
>博后之家 (166)
>考博 (163)
>硕博家园 (155)
>休闲灌水 (142)
>论文投稿 (119)
>基金申请 (90)
>招聘信息布告栏 (55)
>考研 (55)
>教师之家 (52)
>公派出国 (43)
>绿色求助(高悬赏) (38)
>找工作 (37)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cifer1230

金虫 (著名写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 5311.2
帖子: 1680
在线: 160.3小时
虫号: 2093888

[交流] q-pcr总是做不出来，我真是要死了，谁来拯救下我！！！

我普通pcr摸出条带的，做q的时候退火温度也总是不合适，一次次的摸，结果都不太好，总有引物二聚体，我都不知道退火温度咋整了，试着从引物合成报告上减3-5度，也试过用从NCBI上blast的退火温度，都没有好的结果，乱七八糟的，因为刚刚接触，我认为这样盲做也不是办法，想请教下大家。
以下是我最近做的实验，我都快崩溃了，求帮帮忙。
我的引物是生工合成的，纯化程度是ULTRAPAGE
BETA:退火温度分别是，53.4，54.6. BLAST结果是：57
fyn:退火温度分别是55.56,55.75.BLAST结果是：60
这次的实验用的温度是blast的退火温度，结果如下，惨不忍睹。
求各位有经验者指出我的问题，我将不胜感激。
还有我做的是两个引物的标准曲线

AMPLIFICATION.png