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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 蛋白表面疏水性
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13122327737

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表面疏水性 已有1人参与

测肌原纤维蛋白表面疏水性的方法除了荧光探针法，我用的是化学方法，如下：
1ml 0.1%的肌原纤维蛋白加200微升的溴酚蓝，对照为1ml的pH6.0，,2mM的磷酸缓冲液，空白为磷酸缓冲液，震荡10min，2000r离心15min，取上清液稀释10倍，595nm处测吸光值。请问这种方法的结果跟荧光法得出的结果有什么区别吗？表征的含义是一样的吗？能反应蛋白三级结构的变化吗？
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1楼 2017-07-30 18:16:19
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zss2

新虫 (初入文坛)
请问楼主做出来了吗？我最近做这个实验，样品的吸光度有的低于对照组的吸光度？请问楼主有遇到这种问题吗？
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5楼2022-11-03 15:15:05
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、表征一般包括以下内容：
一级结构和翻译后修饰       
- 完整蛋白分子量和还原分子量
- 液质联用肽谱图分析
- 糖基化分析
- 二硫键分析
- N 端和 C 端确证
活性分析       
- 抗原结合分析

2、测肌原纤维蛋白表面疏水性的方法，两者差异是存在的，但是都可以得到结论。

3、利用荧光探针技术研究蛋白质在溶液中的构象有两种方法:一种是测定蛋白质分子的自身荧光,即“内源荧光”,另一种是利用荧光探测剂,即“外源荧光”。
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-30 23:19:28
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13122327737

新虫 (初入文坛)
13122327737: 回帖置顶 2017-07-31 16:39:57
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-30 23:19:28
1、表征一般包括以下内容：
一级结构和翻译后修饰       
- 完整蛋白分子量和还原分子量
- 液质联用肽谱图分析
- 糖基化分析
- 二硫键分析
- N 端和 C 端确证
活性分析       
- 抗原结合分析

2、测肌原纤维蛋白 ...

谢谢您的回复，我的结果是  溴酚蓝结合量（微克）=200微克*（A对照-A样品）/A对照。我想问一下，这个200微克是固定的吗？还有上面的那个稀释倍数，我是稀释了10倍，如果我稀释50倍，对结果有影响吗？因为公式里面并没有稀释倍数这个因子。
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3楼2017-07-31 16:39:02
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13122327737

新虫 (初入文坛)
13122327737: 回帖置顶 2017-08-01 20:04:40
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-30 23:19:28
1、表征一般包括以下内容：
一级结构和翻译后修饰       
- 完整蛋白分子量和还原分子量
- 液质联用肽谱图分析
- 糖基化分析
- 二硫键分析
- N 端和 C 端确证
活性分析       
- 抗原结合分析

2、测肌原纤维蛋白 ...

谢谢您的回复，我的结果是  溴酚蓝结合量（微克）=200微克*（A对照-A样品）/A对照。我想问一下，这个200微克是固定的吗？还有上面的那个稀释倍数，我是稀释了10倍，如果我稀释50倍，对结果有影响吗？因为公式里面并没有稀释倍数这个因子。
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4楼2017-07-31 16:39:06
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