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丝状真菌基因敲除 筛不出完全敲除的菌 已有2人参与
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丝状真菌用农杆菌介导的方法做基因敲除，上下游同源臂分别为3KB，在抗性板上出现的转化子做PCR验证，若敲除掉应该只有一条3KB的电泳条带，野生型只有一条1KB的带。现在挑了100个菌，出现的是只有1KB和两条带都有的情况。出现两条带的菌用另一对引物验证，显示部分基因组发生双交换，但不完全。请问一下做过真菌敲除实验的高手们，是菌没挑对，还需继续挑，还是需要对那些部分双交换的菌进行纯化，知道筛到纯的。 发自小木虫IOS客户端 |
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您好，我也是，但我做的是酵母，我的都是电转之后在抗性板子上生长，挑单菌落培养两天，抽提基因组，用特异性引物PCR，结果发现抗性片段和目的基因片段都在，请问您这个问题解决了吗，还是要重新转化吗？ 发自小木虫Android客户端 |
15楼2022-03-03 16:16:39
1009238055
金虫 (小有名气)
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3楼2017-12-01 15:50:29
4楼2017-12-02 11:35:13
lggy1321
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- 专业: 环境微生物学
5楼2017-12-23 22:50:14
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