| 查看: 2257 | 回复: 14 | |||
[求助]
丝状真菌基因敲除 筛不出完全敲除的菌 已有2人参与
|
|||
|
丝状真菌用农杆菌介导的方法做基因敲除，上下游同源臂分别为3KB，在抗性板上出现的转化子做PCR验证，若敲除掉应该只有一条3KB的电泳条带，野生型只有一条1KB的带。现在挑了100个菌，出现的是只有1KB和两条带都有的情况。出现两条带的菌用另一对引物验证，显示部分基因组发生双交换，但不完全。请问一下做过真菌敲除实验的高手们，是菌没挑对，还需继续挑，还是需要对那些部分双交换的菌进行纯化，知道筛到纯的。 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有234人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
1009238055
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 4535.4
- 红花: 1
- 帖子: 243
- 在线: 34.6小时
- 虫号: 3326518
- 注册: 2014-07-16
- 专业: 病原真菌学
3楼2017-12-01 15:50:29
 |
2楼2017-08-19 20:39:34
4楼2017-12-02 11:35:13
lggy1321
新虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1202.1
- 散金: 1542
- 红花: 26
- 沙发: 1
- 帖子: 1559
- 在线: 402小时
- 虫号: 6653008
- 注册: 2017-05-31
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
5楼2017-12-23 22:50:14
6楼2018-03-20 11:45:32
7楼2018-03-20 11:45:56
8楼2018-03-20 11:47:59
1009238055
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 4535.4
- 红花: 1
- 帖子: 243
- 在线: 34.6小时
- 虫号: 3326518
- 注册: 2014-07-16
- 专业: 病原真菌学
【答案】应助回帖
|
查查文献看看是不是敲除致死，敲除致死的话也挑不出转化子，并且筛选平板上菌落不会太多。如果致死，可以选择干扰。 如果敲除不致死，这样的情况就要考虑敲除材料和敲除体系有没有问题了，下次转的时候可以用一个验证正确带荧光的载体测一测敲除体系效率,再好好检查一下你的载体左右臂有没有问题，和基因组中其他编码区同源性怎么样。 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2018-03-20 12:27:39
。 10楼2018-03-27 16:43:19
