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丝状真菌基因敲除 筛不出完全敲除的菌已有2人参与
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丝状真菌用农杆菌介导的方法做基因敲除，上下游同源臂分别为3KB，在抗性板上出现的转化子做PCR验证，若敲除掉应该只有一条3KB的电泳条带，野生型只有一条1KB的带。现在挑了100个菌，出现的是只有1KB和两条带都有的情况。出现两条带的菌用另一对引物验证，显示部分基因组发生双交换，但不完全。请问一下做过真菌敲除实验的高手们，是菌没挑对，还需继续挑，还是需要对那些部分双交换的菌进行纯化，知道筛到纯的。 发自小木虫IOS客户端 |
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【答案】应助回帖
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查查文献看看是不是敲除致死，敲除致死的话也挑不出转化子，并且筛选平板上菌落不会太多。如果致死，可以选择干扰。 如果敲除不致死，这样的情况就要考虑敲除材料和敲除体系有没有问题了，下次转的时候可以用一个验证正确带荧光的载体测一测敲除体系效率,再好好检查一下你的载体左右臂有没有问题，和基因组中其他编码区同源性怎么样。 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2018-03-20 12:27:39
。10楼2018-03-27 16:43:19