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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 丝状真菌基因敲除 筛不出完全敲除的菌
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an安琳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by 555weiteng at 2017-07-10 22:13:12
丝状真菌用农杆菌介导的方法做基因敲除，上下游同源臂分别为3KB，在抗性板上出现的转化子做PCR验证，若敲除掉应该只有一条3KB的电泳条带，野生型只有一条1KB的带。现在挑了100个菌，出现的是只有1KB和两条带都有的情 ...

你好 能问 真菌基因敲除后我也遇到了 既能P出原基因的片段 也能P出抗性片段请问怎么纯化的呀谢谢谢谢 不胜感激

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11楼2019-05-18 12:09:05
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长发小魔女

新虫 (正式写手)
想问一下问题解决了吗？我也是现在敲除丝状真菌的一个基因，一直敲不掉，转化子都是随机插入的

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12楼2019-05-28 00:45:16
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尹俊采

新虫 (小有名气)
农杆你确定敲除好了？必须很确定，否则接下来的没有意义

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13楼2019-08-21 13:30:17
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萝卜和香菜

新虫 (初入文坛)
前辈，我现在在做丝状真菌敲除能不能指导一下下

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14楼2020-08-24 16:34:06
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cTiyAmo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 555weiteng at 2017-07-10 22:13:12
丝状真菌用农杆菌介导的方法做基因敲除，上下游同源臂分别为3KB，在抗性板上出现的转化子做PCR验证，若敲除掉应该只有一条3KB的电泳条带，野生型只有一条1KB的带。现在挑了100个菌，出现的是只有1KB和两条带都有的情 ...

您好，我也是，但我做的是酵母，我的都是电转之后在抗性板子上生长，挑单菌落培养两天，抽提基因组，用特异性引物PCR，结果发现抗性片段和目的基因片段都在，请问您这个问题解决了吗，还是要重新转化吗？

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15楼2022-03-03 16:16:39
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