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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 丝状真菌基因敲除 筛不出完全敲除的菌
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555weiteng

新虫 (初入文坛)

[求助] 丝状真菌基因敲除 筛不出完全敲除的菌 已有2人参与

丝状真菌用农杆菌介导的方法做基因敲除，上下游同源臂分别为3KB，在抗性板上出现的转化子做PCR验证，若敲除掉应该只有一条3KB的电泳条带，野生型只有一条1KB的带。现在挑了100个菌，出现的是只有1KB和两条带都有的情况。出现两条带的菌用另一对引物验证，显示部分基因组发生双交换，但不完全。请问一下做过真菌敲除实验的高手们，是菌没挑对，还需继续挑，还是需要对那些部分双交换的菌进行纯化，知道筛到纯的。

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1楼 2017-07-10 22:13:12
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萝卜和香菜

新虫 (初入文坛)
前辈，我现在在做丝状真菌敲除能不能指导一下下

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14楼2020-08-24 16:34:06
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1009238055

金虫 (小有名气)
这是没有同源重组，直接插入突变了吧，一百个都没有出来，再挑菌成功希望也不是很大，出现两条带的八成是插入突变了，建议重新转

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3楼2017-12-01 15:50:29
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前行的璐

新虫 (小有名气)
你好，我想问下你是用的农杆菌什么菌种呢？我最近在做农杆菌的转化，希望可以向你请教
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4楼2017-12-02 11:35:13
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lggy1321

新虫 (著名写手)
用农杆重新转一次吧。继续挑也基本不会有3kb了吧

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5楼2017-12-23 22:50:14
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