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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qiaoqiao1223

新虫 (小有名气)

[求助] 求助:定量PCR结果无CT值

昨天跑了一次定量,想做标准曲线,但是出来的结果没有CT值。反应模板是线粒体DNA,引物、反应条件等都是经其他实验室测定、摸索过的。
我们把标准样品梯度稀释,只有浓度最高的样品有CT值,30多。
同时一起跑的几个待测样品,也有的有CT值(30多),有的没有。

这种情况是不是说明我们标准样品的浓度太低了?
下一步调整是需要增加样品浓度?还是增加循环次数时间?还是两个都要? 或者是因为别的问题?
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qiaoqiao1223

新虫 (小有名气)

附上第一次和第二次的曲线图。
第一次不知道什么情况。。用的是自己扩增的质粒做标准样品 A。循环35个
第二次用了两种标准样品,一个是别人给的B,一个是第一次用的A。(A就是B的扩增产物)循环40个。

我质粒扩增的是不是也有问题啊。。当时A测的浓度是1000多,B的浓度只有200多。
求助:定量PCR结果无CT值
第一次溶解曲线


求助:定量PCR结果无CT值-1
第二次溶解曲线


求助:定量PCR结果无CT值-2
第一次结果


求助:定量PCR结果无CT值-3
第二次结果

13楼2017-07-06 12:56:03
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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-05 07:42:42
最好先用PCR试试条件,跑电泳确认能P出条带
坚持!
2楼2017-07-04 08:46:14
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-05 07:42:28
一般荧光定量PCR Ct值30多,说明模板浓度比较低,需要提高模板浓度。PCR结束有扩增曲线的话再跑胶确认下片段大小。循环数可以增加到40。
保持平常心❤
3楼2017-07-04 09:03:08
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fano8o9sin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是模板浓度太低了,一般循环次数设置到40
4楼2017-07-04 10:12:44
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