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qiaoqiao1223

新虫 (小有名气)

[求助] 求助:定量PCR结果无CT值

昨天跑了一次定量,想做标准曲线,但是出来的结果没有CT值。反应模板是线粒体DNA,引物、反应条件等都是经其他实验室测定、摸索过的。
我们把标准样品梯度稀释,只有浓度最高的样品有CT值,30多。
同时一起跑的几个待测样品,也有的有CT值(30多),有的没有。

这种情况是不是说明我们标准样品的浓度太低了?
下一步调整是需要增加样品浓度?还是增加循环次数时间?还是两个都要? 或者是因为别的问题?
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-05 07:42:28
一般荧光定量PCR Ct值30多,说明模板浓度比较低,需要提高模板浓度。PCR结束有扩增曲线的话再跑胶确认下片段大小。循环数可以增加到40。
保持平常心❤
3楼2017-07-04 09:03:08
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by qiaoqiao1223 at 2017-07-06 13:25:38
刚刚又做了一次定量。只有几个样品有CT值。用PCR产物跑了个胶,一个条带都没有。。...

不知道楼主PCR时,质粒的浓度?一般,PCR模板为提取基因组时,浓度范围10-100ng/uL;PCR模板为PCR产物或质粒时,浓度范围1-10pg/uL。
保持平常心❤
17楼2017-07-07 17:12:53
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