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双酶切假阳性怎么办 已有1人参与
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双酶切为什么会形成假阳性呢 发自小木虫Android客户端 |
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stabilized
银虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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长出来的很可能是空载体，而是在连接之前就没切开的，还很有可能是回收的时候不注意且下了未切开的片断，因为载体质量大，跑开时离加样孔很近。 做双酶切的时候一定要考虑好两个酶的酶切条件： 一、酶切温度是否一致 二、酶切的Buffer是否一致，虽然有时候有通用的Buffer，例如EcoR I和Bam I，用的通用的Buffer是K Buffer,但是有一个酶的120％的酶切效率的，一不小心就给切过了，时间很不好把握的，如果能分开酶切就尽量了！！！ 三、酶切时间一定要把握好的，有朋友酶切时间长了多切下来了100bp。 相对来说，粘性末端的双酶切还算是比较好的。 还有抗生素不能高温长时间放置！！！ |
2楼2017-06-23 16:01:48
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非常感谢你的回复，首先，我这酶切用的是快酶，buffer是通用的，空载体酶切得到的是单一的条带也会是没切开吗？其次，挑单菌落pcr时都是阳性，阴性对照也p出来了，最近实验室的同学 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-06-23 23:44:33
4楼2017-06-23 23:45:39