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lsh8665001

新虫 (小有名气)

[求助] 高效液相定性定量 已有2人参与

本人做酚酸,样品里面有很多峰,用了八种混合标品对照,但是很难定性,因为根据保留时间定性很不准确,想咨询一下有没有用高液做过定性与定量的,请求帮助。请问在定量的时候是先加混标定性还是单标定性,再来定量呢?如图分别为8种酚酸在260的峰图,以及样品在260的峰图。其中有五种物质在320吸收更大。

高效液相定性定量


高效液相定性定量-1


高效液相定性定量-2


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火星人学霸

新虫 (小有名气)

只看老师做过,静待大神解答

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2楼2017-06-23 18:59:55
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lsh8665001: 金币+3, 有帮助 2017-08-20 10:40:53
逐个进单标,最好测定全波长吸收,找最大值。最重要的是每一个化合物出峰时间,
然后混标,测定梯度,找合适范围,做标曲。同时可以分开波长测。
然后测定样品。
最简单的方法是对照文献,最好是能测定一针样品的LC-MS,用质谱辅助定性。
3楼2017-06-24 14:24:44
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Meteorage

新虫 (正式写手)

4楼2017-06-24 14:54:05
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lsh8665001

新虫 (小有名气)

谢谢!我去做来试一试,但是LCMS的前处理和高液一样吗?

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5楼2017-06-25 00:10:35
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Lion ivy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议你先把各个standard 单独用方法跑一遍 比如进样量5ul 只是个例子 你可用10ul一样 因为是纯品 一点点就够 确定每一个retention time 然后再合在一起 跑一个mixture 观察每一个的intensity和进样量是多少 然后配mixture的时候 可以调整一下 让波峰面积看起来相似 这样比较好看 只是美观的角度 进样量时候全进去
然后单独跑你的样品 确定你样品里的波峰不会和你用的standard有fuse在一起 这样的话 才可以确定你的standard是可以的 如果有重合的话 你可以减掉standard的波峰面积在计算 也是可以的 但最好不要
还有你的图一里面 前面几分钟基线漂了 你前面的波峰面积 应该重新调整基线在计算 因为现在自动出来的面积比实际大 你可以试着 缓慢上升梯度 就是延长一点时间 或者减少流速和柱温 会有帮助的
最后 retention time有shift是很正常的事情 只要你整个图谱的pattern是一致的就可以了
祝顺利
6楼2017-08-20 00:34:34
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Lion ivy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lsh8665001: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-08-20 10:40:37
忘记说吸收波了。。。 你定量时候可以找每个peak的 optimum wavelength去看波峰面积
出图时候 可以找一个nm是所有波峰都出现的图 然后标出来是在多少nm读的图 就可以了
7楼2017-08-20 00:36:14
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lsh8665001

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Lion ivy at 2017-08-20 00:36:14
忘记说吸收波了。。。 你定量时候可以找每个peak的 optimum wavelength去看波峰面积
出图时候 可以找一个nm是所有波峰都出现的图 然后标出来是在多少nm读的图 就可以了

谢谢,我后面按照单标进样,用梯度洗脱,先跑单标品,再混标结果就好很多,现在准备做样品的加标,不知有没有好的建议!图一为样品,图二为混标!三个波长。
高效液相定性定量-3


高效液相定性定量-4



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8楼2017-08-20 10:38:39
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