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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 在大样本群体中能否用高效液相色谱代替液质联用
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sufeier3

新虫 (初入文坛)

[求助] 在大样本群体中能否用高效液相色谱代替液质联用 已有1人参与

我现在有一个花朵颜色分离的F1杂交群体，打算测其花瓣中类黄酮和类胡罗卜素含量，然后进行QTL分析。我这个材料课题组以前没有测过这两类物质，所以具体的物质种类不是很清楚，我实验室没有液质联用仪器，拿到外面做一个样100元，我总共有2400个样要测，所以花费太高，导师不乐意，想问问色谱质谱大侠，我可不可以先侧几个样本的类黄酮和类胡罗卜素，分析清楚所含物质种类，然后用高效液相色谱对群体样本进行定性定量的测量？或者有什么别的招数，能保证测量数据精度，又能节省开支？
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1楼 2015-01-26 10:34:51
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
我建议你还是拿到外面测吧，并不是每个测试机构都是按照单个样品来收费的，有些可以算在一起收费，会便宜一些。因为你需要从零开始建立实验方法，而且是在不清楚物质种类的情况下，单凭液相来定性，无法得到有说服力的结果。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
2楼2015-01-26 11:52:20
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果知道你只会生成这两种产物，只是量不同，应该是可以用HPLC来做的。当然HPLC本身灵敏度比LC-MS可是低不少，可能的干扰也多，你需要综合考虑。

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3楼2015-01-26 12:58:31
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sufeier3

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-26 11:52:20
我建议你还是拿到外面测吧，并不是每个测试机构都是按照单个样品来收费的，有些可以算在一起收费，会便宜一些。因为你需要从零开始建立实验方法，而且是在不清楚物质种类的情况下，单凭液相来定性，无法得到有说服力 ...

谢谢回复！我想测花瓣中的呈色物质，包括类胡罗卜素和类黄酮两类色素，每种包含十多种物质（根据文献估计的），而且两类色素的测量条件不一样，估计不能一起跑，所以每个样品要分两次跑，我的群体有200个左右个体，我打听林大和农科院做液质联用一针100元，你能给推荐几家靠谱的测试机构吗？
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4楼2015-01-26 14:32:07
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sufeier3

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by superyeast at 2015-01-26 12:58:31
如果知道你只会生成这两种产物，只是量不同，应该是可以用HPLC来做的。当然HPLC本身灵敏度比LC-MS可是低不少，可能的干扰也多，你需要综合考虑。

谢谢回复！两类色素都包括很多种物质，但具体成分还不知道，如果这样的话可不可以先用质谱联用测测两个亲本的两类色素的物质种类和含量，清楚里面含有的物质种类，然后以这些物质为标准，整个群体再跑HPLC可行吗？
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5楼2015-01-26 14:38:29
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superyeast

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★
archbishop: 金币+3, 辛苦了 2015-01-26 15:14:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by sufeier3 at 2015-01-25 18:38:29
谢谢回复！两类色素都包括很多种物质，但具体成分还不知道，如果这样的话可不可以先用质谱联用测测两个亲本的两类色素的物质种类和含量，清楚里面含有的物质种类，然后以这些物质为标准，整个群体再跑HPLC可行吗？...

能不能从另一种角度出发：你可以向仪器生产商求助，看看能否买便宜些的二手仪器---经过原厂检修，和新仪器一样有保修期。也可以以租赁形式使用新仪器。这两种选择的花销都比买新仪器少很多。当然养一台质谱还需要前级泵，液氮，操作人员培训，耗材等等，也是一笔开销。如果自己做需要有心理准备。Agilent在这方面比较灵活的，他们的仪器和软件上手也比较快---强烈推荐。

如果样品复杂，尤其是类似物质多的时候光靠HPLC确实数据禁不起推敲。
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6楼2015-01-26 15:05:52
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by sufeier3 at 2015-01-26 14:32:07
谢谢回复！我想测花瓣中的呈色物质，包括类胡罗卜素和类黄酮两类色素，每种包含十多种物质（根据文献估计的），而且两类色素的测量条件不一样，估计不能一起跑，所以每个样品要分两次跑，我的群体有200个左右个体， ...

这个我推荐不了。你可以参考专家的意见，比如能否租赁他们的仪器。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
7楼2015-01-26 15:16:09
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sufeier3

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by superyeast at 2015-01-26 15:05:52
能不能从另一种角度出发：你可以向仪器生产商求助，看看能否买便宜些的二手仪器---经过原厂检修，和新仪器一样有保修期。也可以以租赁形式使用新仪器。这两种选择的花销都比买新仪器少很多。当然养一台质谱还需要前 ...

好的，谢谢！我回头跟老板在商量商量
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8楼2015-01-26 18:08:37
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
液质也只能知道分子量而已，结构都是推测出来的。建议先拿液相做个类似于指纹图谱的分析，然后通过你有标准品进行比对，在通过标准品的光谱进行同类筛查，筛查完毕后确定几个目标峰，然后再去使用液质，这样目的明确，也能省些精力和钱。
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sufeier3
9楼2015-01-26 20:38:39
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sufeier3

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by wyy080214 at 2015-01-26 20:38:39
液质也只能知道分子量而已，结构都是推测出来的。建议先拿液相做个类似于指纹图谱的分析，然后通过你有标准品进行比对，在通过标准品的光谱进行同类筛查，筛查完毕后确定几个目标峰，然后再去使用液质，这样目的明确 ...

谢谢回复！你说的很清楚，但我还想知道，确定好目标峰后能不能使用HPLC进行测定，相比液质联用，HPLC的精确度会低很多吗？
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10楼2015-01-27 12:44:25
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