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tong929319

新虫 (初入文坛)

[求助] 易错PCR构建基因文库 已有2人参与

文库构建了快一个月了还是没进展,求助求助~~~一开始使用infusion的方法将易错PCR产物与表达载体直接连接,转化后也就有30个单菌落,阳性克隆还特别少。于是呢我就想将易错PCR产物跟T载先连后续酶切再连表达载体了,但我连上T载提质粒(提的全板的混合质粒)后酶切切不开了。。。大家是怎么构建质粒文库的呀,求大神指点下

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子非鱼ys

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我最近也在做文库,先易错PCR,纯化后进行Mega WHOP 大引物进行全质粒PCR(步骤可以看看博士论文),消化后转化,我的问题出在想把消化产物直接转BL21(DE3),但是一直转不进去。看文献都是直接电转BL21,我的产物转DH5a是没有问题的
2楼2017-07-03 16:01:06
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yaodada123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问楼主文库构建的问题解决了吗?我也是卡在这已经几个月了?求教~谢谢~
3楼2017-08-17 11:40:24
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清风寨

银虫 (小有名气)

我在苏州泓迅做的,挺好挺快
冷风过心变热
4楼2017-08-17 13:22:57
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