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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 易错PCR构建基因文库
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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tong929319

新虫 (初入文坛)

[求助] 易错PCR构建基因文库 已有2人参与

文库构建了快一个月了还是没进展，求助求助～～～一开始使用infusion的方法将易错PCR产物与表达载体直接连接，转化后也就有30个单菌落，阳性克隆还特别少。于是呢我就想将易错PCR产物跟T载先连后续酶切再连表达载体了，但我连上T载提质粒(提的全板的混合质粒)后酶切切不开了。。。大家是怎么构建质粒文库的呀，求大神指点下

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1楼 2017-06-16 19:33:57
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yaodada123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问楼主文库构建的问题解决了吗？我也是卡在这已经几个月了？求教~谢谢~
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3楼2017-08-17 11:40:24
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子非鱼ys

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我最近也在做文库，先易错PCR，纯化后进行Mega WHOP 大引物进行全质粒PCR（步骤可以看看博士论文），消化后转化，我的问题出在想把消化产物直接转BL21（DE3），但是一直转不进去。看文献都是直接电转BL21，我的产物转DH5a是没有问题的
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2楼2017-07-03 16:01:06
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清风寨

银虫 (小有名气)
我在苏州泓迅做的，挺好挺快
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冷风过心变热
4楼2017-08-17 13:22:57
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