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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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小小丫头爱

兑换贵宾

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[求助] 重组质粒双酶切后 点样跑胶 没有目的基因的条带

重组质粒双酶切后 点样跑胶 没有目的基因的条带 具体问题及实验流程 均在附件中详细说明了 请各位大神帮忙
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  • 附件 1 : 质粒构建问题.doc
  • 2017-06-05 20:14:16, 466 K

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慎终如始
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铭记于心2222

主管区长

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没有条带说明没有构件成,我觉得连接体系有问题,dna总量太小,150-200ng  质粒基因摩尔比1:10试试  图4看着向菌落pcr图吧?菌落pcr不准

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2楼2017-06-05 21:11:50
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小小丫头爱

管理员

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送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 铭记于心2222 at 2017-06-05 21:11:50
没有条带说明没有构件成,我觉得连接体系有问题,dna总量太小,150-200ng  质粒基因摩尔比1:10试试  图4看着向菌落pcr图吧?菌落pcr不准

没有做菌落PCR 质粒和目的基因的比例是按照3:1设置的 会不会是没有酶切好啊?怎么看有没有酶切好呢?还有质粒什么情况下会发生自连啊?

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慎终如始
3楼2017-06-06 09:53:08
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铭记于心2222

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

只有一个酶起作用了,连接酶就连上了   双酶切彻底就不会自连了  你把你双酶切产物直接转化,按理说不会长菌,这么做可以看看你酶切效果

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4楼2017-06-06 12:59:43
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小小丫头爱

专家顾问

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送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 铭记于心2222 at 2017-06-06 12:59:43
只有一个酶起作用了,连接酶就连上了   双酶切彻底就不会自连了  你把你双酶切产物直接转化,按理说不会长菌,这么做可以看看你酶切效果

我设置了对照组 就是只有载体片段 没有目的片段的T4酶连接体系 转化感受态细胞 涂布平板 没有长出菌落 可是我的实验组 长出菌落的 进行挑菌 提质粒 进行双酶切 就是只有载体的条带 没有目的片段的条带 是怎么回事?
慎终如始
5楼2017-06-12 09:00:12
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