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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒双酶切后 点样跑胶 没有目的基因的条带
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小小丫头爱

银虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒双酶切后 点样跑胶 没有目的基因的条带

重组质粒双酶切后 点样跑胶 没有目的基因的条带 具体问题及实验流程 均在附件中详细说明了 请各位大神帮忙
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  • 附件 1 : 质粒构建问题.doc
    • 2017-06-05 20:14:16, 466 K

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慎终如始
1楼 2017-06-05 20:15:58
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铭记于心2222

铜虫 (初入文坛)
没有条带说明没有构件成，我觉得连接体系有问题，dna总量太小，150-200ng  质粒基因摩尔比1:10试试  图4看着向菌落pcr图吧？菌落pcr不准

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小小丫头爱
2楼2017-06-05 21:11:50
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小小丫头爱

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 铭记于心2222 at 2017-06-05 21:11:50
没有条带说明没有构件成，我觉得连接体系有问题，dna总量太小，150-200ng  质粒基因摩尔比1:10试试  图4看着向菌落pcr图吧？菌落pcr不准

没有做菌落PCR 质粒和目的基因的比例是按照3:1设置的 会不会是没有酶切好啊？怎么看有没有酶切好呢？还有质粒什么情况下会发生自连啊？

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慎终如始
3楼2017-06-06 09:53:08
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铭记于心2222

铜虫 (初入文坛)
只有一个酶起作用了，连接酶就连上了   双酶切彻底就不会自连了  你把你双酶切产物直接转化，按理说不会长菌，这么做可以看看你酶切效果

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小小丫头爱
4楼2017-06-06 12:59:43
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小小丫头爱

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 铭记于心2222 at 2017-06-06 12:59:43
只有一个酶起作用了，连接酶就连上了   双酶切彻底就不会自连了  你把你双酶切产物直接转化，按理说不会长菌，这么做可以看看你酶切效果

我设置了对照组 就是只有载体片段 没有目的片段的T4酶连接体系 转化感受态细胞 涂布平板 没有长出菌落 可是我的实验组 长出菌落的 进行挑菌 提质粒 进行双酶切 就是只有载体的条带 没有目的片段的条带 是怎么回事？
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慎终如始
5楼2017-06-12 09:00:12
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