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骆驼人

金虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 2974102
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性别: MM
专业: 植物遗传学

[求助] 酵母双杂交存在自激活，已有1人参与

最近在做酵母双杂交，诱饵是转录因子，存在自激活，3-AT设置了10，25,50,75,100mM的梯度，50mM依然有蓝背景。75,100mM有淡蓝色背景，如果使用高浓度的3-AT是否会影响后续实验结果？我的基因是螺旋-环-螺旋结构，其激活结构域也在其中，贸然删除激活域，势必会影响诱饵的结构及功能，最终会影响到所筛选的实验结果。那么，除了3-AT，删除激活域这些方法外，还有没有其他的方法在不改变诱饵的结构与功能的情况下，来抑制自激活的现象呢？谢谢！

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愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物

1楼 2017-06-01 10:56:25

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dd6623458

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 5746732
注册: 2017-02-25
专业: 作物种质资源与遗传育种学

你好，你是做自激活验证，还是筛库？我的问题Gal4 系统做点对点的杂交验证前，用重组BD和空载共转Y2H Gold涂SD/-TRP/-LEU/-HIS验证自激活，发现有自激活现象；在TDO中加入3-AT抑制自激活，我现在3-AT加到15mM，还是存在自激活。据说3-AT加到10最好，再往后加大浓度就不好了。那么验证自激活，有没有3-AT加到10或者是20以上的？还有，如果存在自激活，要把这个蛋白的转录激活域切除，大家是怎么切除的？有点啰嗦，多谢了。你是怎么知道基因结构的，预测的吗？