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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 酵母双杂交存在自激活，
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骆驼人

金虫 (正式写手)

[求助] 酵母双杂交存在自激活， 已有1人参与

最近在做酵母双杂交，诱饵是转录因子，存在自激活，3-AT设置了10，25,50,75,100mM的梯度，50mM依然有蓝背景。75,100mM有淡蓝色背景，如果使用高浓度的3-AT是否会影响后续实验结果？我的基因是螺旋-环-螺旋结构，其激活结构域也在其中，贸然删除激活域，势必会影响诱饵的结构及功能，最终会影响到所筛选的实验结果。那么，除了3-AT，删除激活域这些方法外，还有没有其他的方法在不改变诱饵的结构与功能的情况下，来抑制自激活的现象呢？谢谢！
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愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物
1楼 2017-06-01 10:56:25
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dd6623458

新虫 (小有名气)
你好，你是做自激活验证，还是筛库？我的问题Gal4 系统做点对点的杂交验证前，用重组BD和空载共转Y2H Gold涂SD/-TRP/-LEU/-HIS验证自激活，发现有自激活现象；在TDO中加入3-AT抑制自激活，我现在3-AT加到15mM，还是存在自激活。据说3-AT加到10最好，再往后加大浓度就不好了。那么验证自激活，有没有3-AT加到10或者是20以上的？还有，如果存在自激活，要把这个蛋白的转录激活域切除，大家是怎么切除的？有点啰嗦，多谢了。你是怎么知道基因结构的，预测的吗？
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哪怕房檐跟屋梁把生活压的再低，但是还是会有另外一片天空的希望
9楼2019-01-25 09:49:27
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-03 07:44:29
貌似你做的方法不对哦，3at可不是抑制菌变蓝的

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2楼2017-06-01 11:00:06
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骆驼人

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2017-06-01 11:00:06
貌似你做的方法不对哦，3at可不是抑制菌变蓝的

那该如何做呢？
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愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物
3楼2017-06-01 14:20:54
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Neo2000

木虫 (著名写手)
好好读操作手册

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4楼2017-06-01 14:23:04
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