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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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enjoy大志

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

付出定有回报
31楼2017-06-02 14:53:25
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贱贱JMe

专家顾问

教导主任

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

引用回帖:
28楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-06-02 12:50:24
我是本科实习新手,求教一部克隆是什么
...

In-Fusion试剂盒或者无缝克隆试剂盒,就是你说的同源重组,你的片段较大,应该也可以,咨询一下厂家,2K以内效率极高
想做一位科研好人
32楼2017-06-02 14:53:29
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幸福的被等

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

试一试含top异构酶的载体,不是T4连接酶,top异构酶连接类似化学反应,只要在抗性平板上长出来的基本就是阳性克隆子,连接的时候比说明书的标准时间稍微延长一点,增加连接效率。

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33楼2017-06-02 15:12:50
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最美的平凡

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

换一种方式吧,市场上现在比较流行同源重组克隆,有的叫无缝拼接,效率很高

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学术狗
34楼2017-06-02 15:19:34
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我好暴躁啊

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
32楼: Originally posted by 贱贱JMe at 2017-06-02 14:53:29
In-Fusion试剂盒或者无缝克隆试剂盒,就是你说的同源重组,你的片段较大,应该也可以,咨询一下厂家,2K以内效率极高...

好的谢谢啦,同源重组也在做

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35楼2017-06-02 17:03:48
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gw254404163

主管区长

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
24楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-06-02 12:45:53
同源重组做过,就是不好连,所以每种都试试,先把传统的酶切连接做好,是这么想。
...

有个近岸生物的重组酶,推荐

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36楼2017-06-02 18:32:51
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ziyya

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

用TAKARA的ligation mix试试,个人感觉比T4好用

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春华不若秋实
37楼2017-06-02 20:41:33
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Ivy尘

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

确认载体酶切完全,宁可内切酶过量一点,因为载体一般是清洁回收,混进没切好的质粒就会造成假阳性。

唉,一把辛酸泪。。。
38楼2017-06-02 22:18:05
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原来,是这样

超级版主

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【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-31 08:49:05
回收片段测浓度确实260/230不好,260都没有峰值。我是第一个酶切后65度灭火20min,然后直接加第二个酶,可是回收的时候浓度还是很低。切3ug,回收了60ng。T_T
...

和我猜想的一样,你回收浓度太低了,才60ng,完全配不出一个好体系。胶回收的时候溶胶液重复过柱3次,洗脱液也过柱2次,片段3000多才60多ng,mol数也就很低了,自然就会形成空载了。然后就是你为什么要单酶切之后灭活再切呢,两个酶温度不一样需要分步切的话没必要灭活的。

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39楼2017-06-02 23:29:56
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hzau103

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
28楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-06-02 12:50:24
我是本科实习新手,求教一部克隆是什么
...

试剂盒

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40楼2017-06-03 16:28:39
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