应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切连接不成功
54/1返回列表
查看: 7025  |  回复: 52
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

我好暴躁啊

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切连接不成功 已有7人参与

双酶切连接这么难吗，怎么就连不上！目的片段3300，载体3000，酶是NEB的。,双酶切后10ulT4连接体系，体积比设了好几个，转化子长了好多，挑菌，菌液PCR都是假阳性，欲哭无泪( ˙-˙ )，该怎么办？

双酶切连接不成功


双酶切连接不成功-1


双酶切连接不成功-2


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-05-30 21:44:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最美的平凡

铁虫 (正式写手)
换一种方式吧，市场上现在比较流行同源重组克隆，有的叫无缝拼接，效率很高

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
学术狗
34楼2017-06-02 15:19:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 53 个回答

macroH
顶

发自小木虫Android客户端
2楼2017-05-30 22:01:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luoyl210

新虫 (著名写手)
我们一般克隆的假阳性比较多，亚克隆不太会出现假阳性

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-05-30 22:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-30 22:40:29
包给我做吧~~~呵呵。大片段本身就不太好连，另外，你酶切位点没有选紧邻的两个吧。。那样可能切不开哈。。然后，你回收片段关注下260/230，最好2左右，最差也要大于1.5，要么成功率会很低。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2017-05-30 22:32:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 53 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭