应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助用酵母做基因功能鉴定遇到的问题
71/1返回列表
查看: 1336  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qjgo207

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助用酵母做基因功能鉴定遇到的问题 已有2人参与

向大神求助：将我的目的基因连接在pYES2载体上，通过电转导入到酵母缺陷株gat1中进行功能表达，在sc-u尿嘧啶缺陷型平板上要三天才能长出白斑，继续长两三天菌斑依然很小，接种到sc-u液体培养基中菌长不起来，长四五天液体培养基依然澄清，但是菌液PCR能扩出目的条带，电镜下观察酵母比电转前小很多。接种到YPD液体培养基中菌很快生长起来，菌液PCR也能验证出目的条带，但是在之后扩培过程中发现菌液PCR扩不出目的条带了。请问有遇到这种情况的吗？扩不出目的基因是因为质粒丢了吗？该怎么避免质粒丢失呢？在sc-u液体培养基中菌长不起来，是因为我的基因不适合用酵母做表达而转录受抑制造成的吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-05-29 22:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoyalin2016

新虫 (初入文坛)
你好   我想问一下你的酵母缺陷菌株是怎么获得的？载体是怎么选择的呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-07-03 08:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2017-08-28 22:20:51
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

艺小妹.

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-09-04 22:58:58
首先你先看突变体的野生型适合转pYES这个载体不？我也用过这个载体，转到一种酵母菌一直转不进去，后来查资料说两者不适合，然后换了一种菌株就转进去了。再者就是用化学法转一下试试看，就是LiAc法，有时候电击对菌伤害很大
赞一下 回复此楼
4楼2017-09-04 19:58:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

troweiyou

新虫 (初入文坛)
我也是相同的情况，用的是SD-ura,在板上3d长出来，转接到液体里死活摇不起来，我都怀疑我没转进去了
赞一下 回复此楼
5楼2017-12-10 12:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

茹茹茹小刺

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by troweiyou at 2017-12-10 12:09:03
我也是相同的情况，用的是SD-ura,在板上3d长出来，转接到液体里死活摇不起来，我都怀疑我没转进去了

我也是同样的情况，固体培养基能长出来，液体长到OD600大约到0.12就长不起来了。但是提下质粒，却又目的条带。求问前辈最后是怎样解决问题的？
赞一下 回复此楼
6楼2018-07-15 18:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不放弃的猫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

酵母细胞的培养一定要注意缺陷，否则会导致转入的质粒丢失情况。
赞一下 回复此楼
7楼2021-12-24 08:23:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qjgo207 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭