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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助用酵母做基因功能鉴定遇到的问题
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qjgo207

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助用酵母做基因功能鉴定遇到的问题 已有2人参与

向大神求助：将我的目的基因连接在pYES2载体上，通过电转导入到酵母缺陷株gat1中进行功能表达，在sc-u尿嘧啶缺陷型平板上要三天才能长出白斑，继续长两三天菌斑依然很小，接种到sc-u液体培养基中菌长不起来，长四五天液体培养基依然澄清，但是菌液PCR能扩出目的条带，电镜下观察酵母比电转前小很多。接种到YPD液体培养基中菌很快生长起来，菌液PCR也能验证出目的条带，但是在之后扩培过程中发现菌液PCR扩不出目的条带了。请问有遇到这种情况的吗？扩不出目的基因是因为质粒丢了吗？该怎么避免质粒丢失呢？在sc-u液体培养基中菌长不起来，是因为我的基因不适合用酵母做表达而转录受抑制造成的吗？
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1楼 2017-05-29 22:46:57
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guoyalin2016

新虫 (初入文坛)
你好   我想问一下你的酵母缺陷菌株是怎么获得的？载体是怎么选择的呢？

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2楼2017-07-03 08:45:23
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匿名

用户注销 (小有名气)
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3楼2017-08-28 22:20:51
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艺小妹.

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-09-04 22:58:58
首先你先看突变体的野生型适合转pYES这个载体不？我也用过这个载体，转到一种酵母菌一直转不进去，后来查资料说两者不适合，然后换了一种菌株就转进去了。再者就是用化学法转一下试试看，就是LiAc法，有时候电击对菌伤害很大
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4楼2017-09-04 19:58:27
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troweiyou

新虫 (初入文坛)
我也是相同的情况，用的是SD-ura,在板上3d长出来，转接到液体里死活摇不起来，我都怀疑我没转进去了
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5楼2017-12-10 12:09:03
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茹茹茹小刺

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by troweiyou at 2017-12-10 12:09:03
我也是相同的情况，用的是SD-ura,在板上3d长出来，转接到液体里死活摇不起来，我都怀疑我没转进去了

我也是同样的情况，固体培养基能长出来，液体长到OD600大约到0.12就长不起来了。但是提下质粒，却又目的条带。求问前辈最后是怎样解决问题的？
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6楼2018-07-15 18:52:03
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不放弃的猫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

酵母细胞的培养一定要注意缺陷，否则会导致转入的质粒丢失情况。
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7楼2021-12-24 08:23:14
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