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qjgo207

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助用酵母做基因功能鉴定遇到的问题 已有2人参与

向大神求助:将我的目的基因连接在pYES2载体上,通过电转导入到酵母缺陷株gat1中进行功能表达,在sc-u尿嘧啶缺陷型平板上要三天才能长出白斑,继续长两三天菌斑依然很小,接种到sc-u液体培养基中菌长不起来,长四五天液体培养基依然澄清,但是菌液PCR能扩出目的条带,电镜下观察酵母比电转前小很多。接种到YPD液体培养基中菌很快生长起来,菌液PCR也能验证出目的条带,但是在之后扩培过程中发现菌液PCR扩不出目的条带了。请问有遇到这种情况的吗?扩不出目的基因是因为质粒丢了吗?该怎么避免质粒丢失呢?在sc-u液体培养基中菌长不起来,是因为我的基因不适合用酵母做表达而转录受抑制造成的吗?
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匿名

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3楼2017-08-28 22:20:51
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guoyalin2016

新虫 (初入文坛)

你好   我想问一下你的酵母缺陷菌株是怎么获得的?载体是怎么选择的呢?

发自小木虫Android客户端
2楼2017-07-03 08:45:23
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艺小妹.

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-09-04 22:58:58
首先你先看突变体的野生型适合转pYES这个载体不?我也用过这个载体,转到一种酵母菌一直转不进去,后来查资料说两者不适合,然后换了一种菌株就转进去了。再者就是用化学法转一下试试看,就是LiAc法,有时候电击对菌伤害很大
4楼2017-09-04 19:58:27
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troweiyou

新虫 (初入文坛)

我也是相同的情况,用的是SD-ura,在板上3d长出来,转接到液体里死活摇不起来,我都怀疑我没转进去了
5楼2017-12-10 12:09:03
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