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尽为幸福

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR没有模板也能扩出目的条带

每次做PCR实验很少加空白对照,最近发现空白对照也能扩出目的片段。以为是那个成分污染了,换掉了除引物以外的所有成分,结果还是能扩出来。但是另外一对引物的空白对照就扩不出来。重新溶了引物,结果还是能扩出来,溶引物用的水和另一对引物PCR所用的水是一样的。昨天又对另外新合成的其他引物进行了PCR,也出现了相同的情况。一对引物空白能扩出目的条带,而另一对引物不能。有人知道是什么可能的原因引起的嘛?

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real-times

新虫 (初入文坛)

Taq酶一般有细菌基因组的污染,做了模板就能扩增出来

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3楼2017-05-19 09:23:19
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real-times

新虫 (初入文坛)

要是做微生物实验Taq要买绝对没有细菌基因组污染的

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4楼2017-05-19 09:24:26
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尽为幸福

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by real-times at 2017-05-19 09:24:26
要是做微生物实验Taq要买绝对没有细菌基因组污染的

平时都用的这种酶,另一对引物空白对照没有扩出条带来

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5楼2017-05-19 09:42:04
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13349308281

铜虫 (小有名气)

pcr模板污染很正常,把所有的东西全部换掉就可以了

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6楼2017-05-19 16:26:46
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冰之雪域

新虫 (小有名气)

我们也遇到过这样的情况,换掉最可能的有问题的试剂,然后去另一个实验台或实验室再做下,说不定就好了,说是存在气溶胶现象

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8楼2017-05-19 22:36:49
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普通回帖

胡奎0925

木虫 (小有名气)

好神奇
宁愿被误会,坚决不解释
2楼2017-05-19 08:55:36
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13349308281

铜虫 (小有名气)

7楼2017-05-19 16:26:59
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江边鸟

银虫 (小有名气)

换个酶 贵点的 好点的 ~taq酶多是大肠杆菌工程产物~没纯化好就有基因污染

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9楼2017-05-20 10:37:36
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尽为幸福

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 13349308281 at 2017-05-19 16:26:46
pcr模板污染很正常,把所有的东西全部换掉就可以了

嗯嗯,谢谢,所有的换过一次,还是不管用。2对引物,只有一对出现这种情况

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10楼2017-05-21 15:45:14
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