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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白可溶性鉴定
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15653823606

金虫 (小有名气)

Nevergiveup

[求助] 蛋白可溶性鉴定 已有1人参与

下图的顺序
M       0mM    1mM     上清     沉淀
这是不是说明表达蛋白全都是包涵体？有没有可能是破碎的不够？
那我接下来应该怎么做？降低温度？或者是复性？

蛋白可溶性鉴定


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1楼 2017-05-14 21:43:24
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何军爱学习

新虫 (小有名气)
从图中基本看出是包涵体了 。可以降低温度看看

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2楼2017-05-14 22:47:58
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掌控恶魔

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-15 21:50:45
基本确定现在表达的是包涵体，可以尝试低温表达。但是不一定百分百成功，可以试试复性。
其实复性是一个不可控的过程，复性后蛋白是否带有多少活性其实都说不清楚吧。
主要看你的蛋白用处是什么
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3楼2017-05-15 10:39:48
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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修身、齐家、治国、平天下
10楼2017-05-15 20:28:57
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普通回帖

alicelchf

木虫 (著名写手)
换个载体?

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修身、齐家、治国、平天下
4楼2017-05-15 10:58:25
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稻草人儿

新虫 (小有名气)
我现在也遇到了这个问题，

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5楼2017-05-15 15:45:05
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15653823606

金虫 (小有名气)

Nevergiveup
引用回帖:
2楼: Originally posted by 何军爱学习 at 2017-05-14 22:47:58
从图中基本看出是包涵体了 。可以降低温度看看

我正在准备 低温 试试。
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6楼2017-05-15 16:10:40
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15653823606

金虫 (小有名气)

Nevergiveup
引用回帖:
3楼: Originally posted by 掌控恶魔 at 2017-05-15 10:39:48
基本确定现在表达的是包涵体，可以尝试低温表达。但是不一定百分百成功，可以试试复性。
其实复性是一个不可控的过程，复性后蛋白是否带有多少活性其实都说不清楚吧。
主要看你的蛋白用处是什么

主要是结合脂质的，是个脂质结合转运的膜蛋白，我只表达了结合的结构域，希望验证功能，这样的话，我也不知道会不会有影响。
可是为什么上清一点都没有？我也怀疑是破碎的不好
只能先试试低温
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7楼2017-05-15 16:13:11
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呢我

新虫 (小有名气)
不懂

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8楼2017-05-15 16:14:10
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15653823606

金虫 (小有名气)

Nevergiveup
引用回帖:
4楼: Originally posted by alicelchf at 2017-05-15 10:58:25
换个载体?

其实换过一次了。之前的都不表达。我先做做看吧。
这个和载体的关系很密切吗？
我做的原核表达
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9楼2017-05-15 16:14:34
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