| 查看: 2023 | 回复: 9 | ||
[求助]
基因扩增PCR一直跑不出亮带 已有2人参与
|
|
表示刚刚学习这些东西真是万事开头难…跑了好几天真的想哭…… 想请教一下： 1. 做反转录的时候RNA是不是不能震荡？ 2. 基因片段684dp，引物的GC含量和TM一般多少比较合适还是没有什么影响？ 3. Taq酶影响大不大？ 4. pcr仪的值你们一般怎么设定的呀…… 5. 跑出来连maker都不太亮到底是怎么了 一直在找原因，第一天没跑出来第二天重新设了温度梯度，第三天重新做了模板……表示毫无起色求指导～谢大神们  @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有125人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 眼下在做关于青枯病的课题 出了问题难以解决
已经有7人回复
- 扩增目的基因，疑似有核酸污染，不知怎么去除
已经有3人回复
- 欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！
已经有25人回复
- 未知基因片段的钓取讨论，恳请大家帮我分析分析
已经有6人回复
shuangzi8761
管理员
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 6472.4
- 散金: 798
- 红花: 8
- 帖子: 1549
- 在线: 309.3小时
- 虫号: 1449451
- 注册: 2011-10-18
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
2楼2017-05-09 06:07:23
3楼2017-05-09 07:23:29
|
rt稀释过了的，温度我是最低温减3度到最高温加3度（不超过60度）设置了四个梯度，胶我用的稀释的tae50倍液（里面还加了RNA酶清除剂），然后1:100的胶粉，DNA buffer也没过期呀，一般一个胶孔是打多少buffer和样呀 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-05-09 10:46:58
wanru1998
兑换贵宾
|
本帖内容被屏蔽 |
5楼2017-05-09 10:57:57
|
基因（非编码区+编码区）：GGGTATTGATGCTTCAACGCCGATCTTAATCCAAATTAAATATCCTCCCAAAATAAAGAGCCTAATAGTTCAGTACAAAAGTATGCAATAGTTGAGTACATGGGTCAGTTTTTTTGTTCAAATACATAAACATGGGTTATCATGATGATAGTCATTTCCATGATGAATAAGTTTCATGTCCCTAAACTTTATATATGACACTTTTTGCCTTAATTTTTACAAGTTAAAGGCTTAAACCGTAGACGATAAAGCTTAGACACTTATGTACCAATTCAGTGAAATGAAGGTTTATAACGTTCCATCTTTAGAACTATTATCTTCAACATTAACATTGAAAGAACATTTCTTTGAATAAAAAAAGAATCATAGATTATAAAAAGAATTATAAATCCATAAAATGTTAATGAAACCCTTGATTATCACAATACGATGTAGTTACATACTCCCTAACTTCCCTCTCAACAACTCCTCTCATAACATTCCAAAACCCTTCTTGCACACACTCGGTACTCTTCTCCGGGCGCCTACATTCACCCATCCCAGGAAGCCCTAACGAAAGTGTCGTCATCGGGTCCTCGACATCGGTCCCAACATTTTCATTCGACACGCTTGGAGACGACCTACCACCATCTTTTCCCAAGCTAAAAAGCATCATTTCTTGAGTGTCAACTTTTCGTCTTTTCAACGTGGAATTCCAATGATTCTTAACCGCATTATCAGTCCTACCAGGTAATAACCTGGCAATGGTGGCCCACCGGTTTCCGTACTGAGCATGAGCAGCCAAAATGGTCTCATCCTCAGATATGGAAAACGGTCGGTGCTGCACATTGGGACTGAGCTGGTTACACCAACGGAGTCTACAAGACTTACCTGACCTACCCTTTATGTATTTACTAATAAGTGACCAGTTTTTAGGTCCGTAAGAGTCTACAAGTCGTGTCAAGACTCGATCTTCTTCAGCGCTCCATGGACCTTTTATTTTACTAGTTTTGTTTGAATATTCGGGTTTCAAGCCCGAATATGACGAGTCTGTTGATTCTGATGAAGACGAAGTGGCTGATGAGCATCGATTCAGTGCTTCCATGGTTTATTTTTGTACTAAGAAAATAGATTGTTAAGAGGTTTTGGAATGTTTTAAAGTGAGTTTGTGAGTGTGTGTTGGAGTGTGCCTTATATATAGAGGTTGAAAAAGGGAATGGTGCATGCACATATGAAGAAAATGGGGGGCAAAGAAGTAGCTTCTTGGAAATTGTCTTTTGTAAAGTTAGTTCAAGTTCTTTTATTTAATGGGCTGTTAAATTAAAGTAGATAGTATATATGATTGTTGTGATTTGATAATCAGAATTAGATACTCAGATTCTTTATTTA 基因片段： ATGGAAGCACTGAATCGATGCTCATCAGCCACTTCGTCTTCATCAGAATCAACAGACTCG TCATATTCGGGCTTGAAACCCGAATATTCAAACAAAACTAGTAAAATAAAAGGTCCATGG AGCGCTGAAGAAGATCGAGTCTTGACACGACTTGTAGACTCTTACGGACCTAAAAACTGG TCACTTATTAGTAAATACATAAAGGGTAGGTCAGGTAAGTCTTGTAGACTCCGTTGGTGT AACCAGCTCAGTCCCAATGTGCAGCACCGACCGTTTTCCATATCTGAGGATGAGACCATT TTGGCTGCTCATGCTCAGTACGGAAACCGGTGGGCCACCATTGCCAGGTTATTACCTGGT AGGACTGATAATGCGGTTAAGAATCATTGGAATTCCACGTTGAAAAGACGAAAAGTTGAC ACTCAAGAAATGATGCTTTTTAGCTTGGGAAAAGATGGTGGTAGGTCGTCTCCAAGCGTG TCGAATGAAAATGTTGGGACCGATGTCGAGGACCCGATGACGACACTTTCGTTAGGGCTT CCTGGGATGGGTGAATGTAGGCGCCCGGAGAAGAGTACCGAGTGTGTGCAAGAAGGGTTT TGGAATGTTATGAGAGGAGTTGTTGAGAGGGAAGTTAGGGAGTATGTAACTACATCGTAT TGTGATAATCAAGGGTTTCATTAA 引物：上游：taa ggc aca ctc caa cac c 下游：aaa ccg tag acg ata aag c 温度我设置的47-57度做了4个梯度，但是一个都没出来 |
6楼2017-05-09 11:14:30
7楼2017-05-09 11:15:50
8楼2017-05-09 20:23:13
1294044432
管理员
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 714.7
- 散金: 30
- 帖子: 53
- 在线: 17.6小时
- 虫号: 1093480
- 注册: 2010-09-08
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
|
1不要剧烈震荡。一定要DEPC处理水，枪头和ep管。此处是PCR的关键，模版都没搞好很难分析是PCR的问题。5,marker不亮感觉是是紫外灯的问题 发自小木虫Android客户端 |
9楼2017-05-10 20:49:22
10楼2017-05-13 00:37:14
