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基因扩增PCR一直跑不出亮带 已有2人参与
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表示刚刚学习这些东西真是万事开头难…跑了好几天真的想哭…… 想请教一下： 1. 做反转录的时候RNA是不是不能震荡？ 2. 基因片段684dp，引物的GC含量和TM一般多少比较合适还是没有什么影响？ 3. Taq酶影响大不大？ 4. pcr仪的值你们一般怎么设定的呀…… 5. 跑出来连maker都不太亮到底是怎么了 一直在找原因，第一天没跑出来第二天重新设了温度梯度，第三天重新做了模板……表示毫无起色求指导～谢大神们  @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
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shuangzi8761
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2楼2017-05-09 06:07:23
3楼2017-05-09 07:23:29
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rt稀释过了的，温度我是最低温减3度到最高温加3度（不超过60度）设置了四个梯度，胶我用的稀释的tae50倍液（里面还加了RNA酶清除剂），然后1:100的胶粉，DNA buffer也没过期呀，一般一个胶孔是打多少buffer和样呀 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-05-09 10:46:58
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本帖内容被屏蔽 |
5楼2017-05-09 10:57:57
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基因（非编码区+编码区）：GGGTATTGATGCTTCAACGCCGATCTTAATCCAAATTAAATATCCTCCCAAAATAAAGAGCCTAATAGTTCAGTACAAAAGTATGCAATAGTTGAGTACATGGGTCAGTTTTTTTGTTCAAATACATAAACATGGGTTATCATGATGATAGTCATTTCCATGATGAATAAGTTTCATGTCCCTAAACTTTATATATGACACTTTTTGCCTTAATTTTTACAAGTTAAAGGCTTAAACCGTAGACGATAAAGCTTAGACACTTATGTACCAATTCAGTGAAATGAAGGTTTATAACGTTCCATCTTTAGAACTATTATCTTCAACATTAACATTGAAAGAACATTTCTTTGAATAAAAAAAGAATCATAGATTATAAAAAGAATTATAAATCCATAAAATGTTAATGAAACCCTTGATTATCACAATACGATGTAGTTACATACTCCCTAACTTCCCTCTCAACAACTCCTCTCATAACATTCCAAAACCCTTCTTGCACACACTCGGTACTCTTCTCCGGGCGCCTACATTCACCCATCCCAGGAAGCCCTAACGAAAGTGTCGTCATCGGGTCCTCGACATCGGTCCCAACATTTTCATTCGACACGCTTGGAGACGACCTACCACCATCTTTTCCCAAGCTAAAAAGCATCATTTCTTGAGTGTCAACTTTTCGTCTTTTCAACGTGGAATTCCAATGATTCTTAACCGCATTATCAGTCCTACCAGGTAATAACCTGGCAATGGTGGCCCACCGGTTTCCGTACTGAGCATGAGCAGCCAAAATGGTCTCATCCTCAGATATGGAAAACGGTCGGTGCTGCACATTGGGACTGAGCTGGTTACACCAACGGAGTCTACAAGACTTACCTGACCTACCCTTTATGTATTTACTAATAAGTGACCAGTTTTTAGGTCCGTAAGAGTCTACAAGTCGTGTCAAGACTCGATCTTCTTCAGCGCTCCATGGACCTTTTATTTTACTAGTTTTGTTTGAATATTCGGGTTTCAAGCCCGAATATGACGAGTCTGTTGATTCTGATGAAGACGAAGTGGCTGATGAGCATCGATTCAGTGCTTCCATGGTTTATTTTTGTACTAAGAAAATAGATTGTTAAGAGGTTTTGGAATGTTTTAAAGTGAGTTTGTGAGTGTGTGTTGGAGTGTGCCTTATATATAGAGGTTGAAAAAGGGAATGGTGCATGCACATATGAAGAAAATGGGGGGCAAAGAAGTAGCTTCTTGGAAATTGTCTTTTGTAAAGTTAGTTCAAGTTCTTTTATTTAATGGGCTGTTAAATTAAAGTAGATAGTATATATGATTGTTGTGATTTGATAATCAGAATTAGATACTCAGATTCTTTATTTA 基因片段： ATGGAAGCACTGAATCGATGCTCATCAGCCACTTCGTCTTCATCAGAATCAACAGACTCG TCATATTCGGGCTTGAAACCCGAATATTCAAACAAAACTAGTAAAATAAAAGGTCCATGG AGCGCTGAAGAAGATCGAGTCTTGACACGACTTGTAGACTCTTACGGACCTAAAAACTGG TCACTTATTAGTAAATACATAAAGGGTAGGTCAGGTAAGTCTTGTAGACTCCGTTGGTGT AACCAGCTCAGTCCCAATGTGCAGCACCGACCGTTTTCCATATCTGAGGATGAGACCATT TTGGCTGCTCATGCTCAGTACGGAAACCGGTGGGCCACCATTGCCAGGTTATTACCTGGT AGGACTGATAATGCGGTTAAGAATCATTGGAATTCCACGTTGAAAAGACGAAAAGTTGAC ACTCAAGAAATGATGCTTTTTAGCTTGGGAAAAGATGGTGGTAGGTCGTCTCCAAGCGTG TCGAATGAAAATGTTGGGACCGATGTCGAGGACCCGATGACGACACTTTCGTTAGGGCTT CCTGGGATGGGTGAATGTAGGCGCCCGGAGAAGAGTACCGAGTGTGTGCAAGAAGGGTTT TGGAATGTTATGAGAGGAGTTGTTGAGAGGGAAGTTAGGGAGTATGTAACTACATCGTAT TGTGATAATCAAGGGTTTCATTAA 引物：上游：taa ggc aca ctc caa cac c 下游：aaa ccg tag acg ata aag c 温度我设置的47-57度做了4个梯度，但是一个都没出来 |
6楼2017-05-09 11:14:30
7楼2017-05-09 11:15:50
18794008527
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8楼2017-05-09 20:23:13
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1不要剧烈震荡。一定要DEPC处理水，枪头和ep管。此处是PCR的关键，模版都没搞好很难分析是PCR的问题。5,marker不亮感觉是是紫外灯的问题 发自小木虫Android客户端 |
9楼2017-05-10 20:49:22
10楼2017-05-13 00:37:14
10