24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2840  |  回复: 9

ztt279

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] pcr出现目的条带但序列不对是怎么回事

我克隆目的序列,出现了目的条带,胶回收后连接T载体,转化,蓝白斑筛选,出现了白斑和蓝斑,然后菌液pcr,跑电泳后也出现了目的条带大小的前段,送去测序,却发现与目的片段不一致,这是怎么回事?恳请大牛指教

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江边鸟

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-14 07:50:21
连t载的测序结果看一下有没有测出你的正反引物序列,正反引物区有了,测序没问题。你再送pcr产物测序,产物测序结果正确再连载体。

发自小木虫IOS客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-04-02 11:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztt279

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 江边鸟 at 2017-04-02 11:00:14
连t载的测序结果看一下有没有测出你的正反引物序列,正反引物区有了,测序没问题。你再送pcr产物测序,产物测序结果正确再连载体。

看了一下,确实上下游引物是一样的,那我应该从哪一步改进呀?PCR体系吗?还是哪一步?
3楼2017-04-02 12:03:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztt279

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by 江边鸟 at 2017-04-02 11:00:14
连t载的测序结果看一下有没有测出你的正反引物序列,正反引物区有了,测序没问题。你再送pcr产物测序,产物测序结果正确再连载体。

又看了一下,发现只有一条条带均含有上下游引物,其他的条带有的不含有,有的只含有上游或下游引物,而且与目的条带重叠的部分特别乱,要不然在中间,要不然在下游处,这是什么情况呀?
4楼2017-04-02 12:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztt279

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by 江边鸟 at 2017-04-02 11:00:14
连t载的测序结果看一下有没有测出你的正反引物序列,正反引物区有了,测序没问题。你再送pcr产物测序,产物测序结果正确再连载体。

你说PCR产物直接测序,但是那样PCR产物很容易降解的呀,我还没有试过
5楼2017-04-02 12:52:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuralcrest

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

可能你pcr出来的条带就不是你的目的基因,提高退火温度,或降低反应中的镁离子,或者换引物

发自小木虫Android客户端
有朋自网上来不亦乐乎
6楼2017-04-04 07:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

100913

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

是全不一样还是只有一些碱基不同?

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-04-04 07:41:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztt279

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
7楼: Originally posted by 100913 at 2017-04-04 07:41:49
是全不一样还是只有一些碱基不同?

只有23%左右的重复率,不一样的多

发自小木虫Android客户端
8楼2017-04-04 09:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SFC玮子

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

同求?感觉是引物有问题,有大神可以解答么
9楼2017-04-13 17:43:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

重新设计引物吧,如果连T载体的测序结果每条都不同,说明扩出来时是混合条带,就算是PCR产物测序也有可能测不出来。

发自小木虫Android客户端
10楼2017-04-13 23:13:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ztt279 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 319求调剂 +7 太容易1018 2026-04-01 7/350 2026-04-01 18:33 by zhshch
[考研] 314求调剂 +4 溪云珂 2026-03-26 4/200 2026-04-01 17:00 by oooqiao
[考研] 086502化学工程342求调剂 +7 阿姨复古不过 2026-03-27 7/350 2026-04-01 16:14 by yanflower7133
[考研] 085600,材料与化工321分调剂 +5 大馋小子 2026-03-27 7/350 2026-04-01 15:13 by oooqiao
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +8 YYYYYNNNNN 2026-03-26 10/500 2026-04-01 14:39 by hexingyi
[考研] 材料科学与工程调剂 +15 深V宿舍吧 2026-03-30 16/800 2026-04-01 14:37 by ZXlzxl0425
[考研] 330分求调剂 +11 qzenlc 2026-03-29 11/550 2026-04-01 14:32 by chenqifeng666
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-03-31 6/300 2026-04-01 14:16 by 夜空空哦
[考研] 考研生物与医药调剂 +7 铁憨憨123425 2026-03-31 7/350 2026-04-01 08:45 by JourneyLucky
[考博] 26申博 +4 加油冲啊! 2026-03-26 4/200 2026-03-31 22:42 by greychen00
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 375求调剂 +7 雨夏整夜 2026-03-29 7/350 2026-03-31 18:52 by xhai2011
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:35 by hypershenger
[基金申请] 面上5B能上会吗? +8 redcom 2026-03-29 8/400 2026-03-31 15:53 by niuailing
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 麦恩莉. 2026-03-30 4/200 2026-03-31 14:35 by 记事本2026
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
[考研] 327求调剂 +6 汲亦昊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:40 by peike
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
信息提示
请填处理意见