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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ztt279

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr出现目的条带但序列不对是怎么回事

我克隆目的序列,出现了目的条带,胶回收后连接T载体,转化,蓝白斑筛选,出现了白斑和蓝斑,然后菌液pcr,跑电泳后也出现了目的条带大小的前段,送去测序,却发现与目的片段不一致,这是怎么回事?恳请大牛指教

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100913

新虫 (小有名气)

是全不一样还是只有一些碱基不同?

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7楼2017-04-04 07:41:49
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江边鸟

银虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-14 07:50:21
连t载的测序结果看一下有没有测出你的正反引物序列,正反引物区有了,测序没问题。你再送pcr产物测序,产物测序结果正确再连载体。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-04-02 11:00:14
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ztt279

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 江边鸟 at 2017-04-02 11:00:14
连t载的测序结果看一下有没有测出你的正反引物序列,正反引物区有了,测序没问题。你再送pcr产物测序,产物测序结果正确再连载体。

看了一下,确实上下游引物是一样的,那我应该从哪一步改进呀?PCR体系吗?还是哪一步?
3楼2017-04-02 12:03:07
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ztt279

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 江边鸟 at 2017-04-02 11:00:14
连t载的测序结果看一下有没有测出你的正反引物序列,正反引物区有了,测序没问题。你再送pcr产物测序,产物测序结果正确再连载体。

又看了一下,发现只有一条条带均含有上下游引物,其他的条带有的不含有,有的只含有上游或下游引物,而且与目的条带重叠的部分特别乱,要不然在中间,要不然在下游处,这是什么情况呀?
4楼2017-04-02 12:21:45
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