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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切T载体，胶回收浓度很低，怎么办？
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时光、过客

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切T载体，胶回收浓度很低，怎么办？ 已有2人参与

求助，我在做载体构建，双酶切的酶是snaBI和NotI，双酶切PCR产物或者T载体，回收后浓度都特别低，然后一直就连不上表达载体（9004bp）,已经做了很多次了，就是连不上，不知道怎么办了？？

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1楼 2017-03-31 09:21:54
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chwang1001

新虫 (初入文坛)
可不回收，直接纯化

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2楼2017-03-31 14:19:22
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Ivancao0908

禁言 (初入文坛)
silicare: 屏蔽内容 2017-06-05 12:04:00
本帖内容被屏蔽
3楼2017-03-31 15:10:48
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mkq800

银虫 (小有名气)
PCR产物连t载体了吗？可以试试加大质粒的量，snaBI 就不是常用的酶，看看能不能换个试试。

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4楼2017-04-01 00:14:53
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-02 08:34:13
1. 加大t载体的量，多酶切一些质粒，多做几管，合并纯化
2. 为啥不用同源重组，不比酶切连接省事多了。
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与人玫瑰手有余香
5楼2017-04-01 20:12:52
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时光、过客

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chwang1001 at 2017-03-31 14:19:22
可不回收，直接纯化

可是那切下来两点片段啊，不回收两个片段都在里面

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6楼2017-04-01 23:58:31
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时光、过客

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 路人甲007 at 2017-04-01 20:12:52
1. 加大t载体的量，多酶切一些质粒，多做几管，合并纯化
2. 为啥不用同源重组，不比酶切连接省事多了。

同源重组？你说的是无缝克隆么？

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7楼2017-04-01 23:59:44
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邹忌

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的snaB这个酶不是很常用，可以尝试换个酶切位点。另外你做酶切PCR产物或者是连接到T载体上的片段，记住要多切一点，因为本身回收后损失率也是很大的。
赞一下(2人) 回复此楼
不是不能，只是不想
8楼2017-04-02 09:51:27
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