应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切T载体，胶回收浓度很低，怎么办？
81/1返回列表
查看: 6629  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

时光、过客

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切T载体，胶回收浓度很低，怎么办？ 已有2人参与

求助，我在做载体构建，双酶切的酶是snaBI和NotI，双酶切PCR产物或者T载体，回收后浓度都特别低，然后一直就连不上表达载体（9004bp）,已经做了很多次了，就是连不上，不知道怎么办了？？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-03-31 09:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chwang1001

新虫 (初入文坛)
可不回收，直接纯化

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-03-31 14:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ivancao0908

禁言 (初入文坛)
silicare: 屏蔽内容 2017-06-05 12:04:00
本帖内容被屏蔽
3楼2017-03-31 15:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mkq800

银虫 (小有名气)
PCR产物连t载体了吗？可以试试加大质粒的量，snaBI 就不是常用的酶，看看能不能换个试试。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2017-04-01 00:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-02 08:34:13
1. 加大t载体的量，多酶切一些质粒，多做几管，合并纯化
2. 为啥不用同源重组，不比酶切连接省事多了。
赞一下(1人) 回复此楼
与人玫瑰手有余香
5楼2017-04-01 20:12:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

时光、过客

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chwang1001 at 2017-03-31 14:19:22
可不回收，直接纯化

可是那切下来两点片段啊，不回收两个片段都在里面

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-04-01 23:58:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

时光、过客

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 路人甲007 at 2017-04-01 20:12:52
1. 加大t载体的量，多酶切一些质粒，多做几管，合并纯化
2. 为啥不用同源重组，不比酶切连接省事多了。

同源重组？你说的是无缝克隆么？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-04-01 23:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邹忌

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的snaB这个酶不是很常用，可以尝试换个酶切位点。另外你做酶切PCR产物或者是连接到T载体上的片段，记住要多切一点，因为本身回收后损失率也是很大的。
赞一下(2人) 回复此楼
不是不能，只是不想
8楼2017-04-02 09:51:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 时光、过客 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 CyTWnZiM0cS6 2026-08-02 3/150 2026-08-02 20:43 by 3VGOm6paSgqv
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 9/450 2026-08-02 20:32 by 3VGOm6paSgqv
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 7/350 2026-08-02 20:24 by 3VGOm6paSgqv
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 6/300 2026-08-02 20:21 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 10/500 2026-08-02 20:12 by 3VGOm6paSgqv
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 7/350 2026-08-02 20:11 by 3VGOm6paSgqv
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 13/650 2026-08-02 20:04 by 3VGOm6paSgqv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 10/500 2026-08-02 20:03 by 3VGOm6paSgqv
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 17/850 2026-08-02 19:58 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 21/1050 2026-08-02 19:52 by 3VGOm6paSgqv
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 8/400 2026-08-02 18:44 by ca3DVAx4OB19
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 9/450 2026-08-02 18:27 by ca3DVAx4OB19
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 15/750 2026-08-02 16:23 by jHcrHMhbKCFV
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +18 低垂的野花 2026-07-31 24/1200 2026-08-02 16:03 by swallowwh
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 21/1050 2026-08-02 10:56 by iaeyuan
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 10/500 2026-08-02 10:00 by 锦衣卫寒战
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭