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stantontang

金虫 (小有名气)

[求助] 关于苯酚硫酸法测多糖问题 已有8人参与

测量方法

1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖),配制成0。1g/L,分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置30分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线


每次测标曲同样的条件,得出的结果都不一样,样品平行样之间差别都较大

问题:加硫酸时到底是快速加入,让其放热还是慢慢加?快速加入时,立马变成橙黄色,慢慢加入时,都不变色。

我都测了几次了,没一次稳定的,求大神支招

哪位经常测的,分享下技巧
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duliyu

木虫 (著名写手)

移液管一曲就重力下加入,密封后摇匀,按照方法,就行了,

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守候之戒
4楼2017-03-23 21:12:51
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zmjlilei

铁杆木虫 (著名写手)

只要你每次都是一样的加法,结果还是比较稳定的

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亡命青春
6楼2017-03-24 08:18:21
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MorsThanatos

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我都是贴壁加的硫酸,先加样品,再加苯酚,最后浓硫酸。然后充分震荡(很重要),然后等待时间,测定吸光值。
注意的点:1.浓硫酸最后使用同一瓶,因为浓硫酸每一瓶还是有差异的(厂家,批次) 2.苯酚我都是一次配置大量,够用半个月的,不然每次配置还是有差异的 3.这个实验还是很灵敏的,操作手法(最好同一个人操作) 4.标曲最好换了不同批次硫酸和新配苯酚都重新测量,不能一直使用最早做的标曲,不然变化很大。
能想到的就是这么多,我做重复性还是很高的。
9楼2017-03-24 10:22:11
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普通回帖

倾雨晨

木虫 (著名写手)

2楼2017-03-23 11:25:36
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zsj19910511

金虫 (小有名气)

3楼2017-03-23 12:01:35
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简夕摇

新虫 (初入文坛)

加硫酸快速加,每次样品和标曲一起做,

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5楼2017-03-24 07:17:37
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w911227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
快速加入,另外移液管最好垂直于液面加入,不要延壁加,硫酸顺着试管壁加进去的吸光值会低很多,这个一定要注意。
苦难的日子终将逝去,但强者却永存
7楼2017-03-24 08:52:45
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qingxiayuan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我很是奇怪浓硫酸加入时如何快速或如何缓慢,难道不都是松开移液管上方让其自然落下。如果一下子加很多管是没有办法控制都以同一种方式加入,垂直加入时,混合物马上就会反应显色,如果贴壁会相对慢些,后续摇匀都没有什么明显误差。个人认为这个方法很稳定,做标曲很关键的是标准品的配制、稀释及加入。
8楼2017-03-24 09:09:19
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倾雨晨

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by qingxiayuan at 2017-03-24 09:09:19
我很是奇怪浓硫酸加入时如何快速或如何缓慢,难道不都是松开移液管上方让其自然落下。如果一下子加很多管是没有办法控制都以同一种方式加入,垂直加入时,混合物马上就会反应显色,如果贴壁会相对慢些,后续摇匀都没 ...

我都是用滴管加硫酸,误差很大,是不是因为这个啊

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10楼2017-03-24 10:54:12
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