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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大片段基因连接，转化问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段基因连接，转化问题 已有4人参与

我想把一个6.5kb的片段倒入4.7kb的载体中，insert 是从一个质粒上切下来的，保证有相同的酶切位点，连接体系试过1:1，2:1, 3:1，热激，都不成功，已经做了快俩月了，求大神帮忙！

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1楼 2017-03-22 21:47:11
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实验李七七

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-23 15:06:10
我之前连过六千多的片段。我当时的载体是八千多，也是连了好久连不上，后来在片段中间找了个酶切位点，切下来。相当于三个东西一起连。终于做出来了。按照这个方法。一口气做出来四个这种克隆。你这个可以把比例换 ...

请问你是怎么三个一起连接的？
是把两个片段和载体都加在一起吗？那么体系是什么样的呢?
谢谢
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19楼2017-11-02 23:48:39
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
怎么个不成功法？

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2楼2017-03-22 23:44:45
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
是不长菌，还是都是假阳性？

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3楼2017-03-22 23:45:21
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-22 23:44:45
怎么个不成功法？

有过两次假阳性，其余几次都是不长菌

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4楼2017-03-23 01:40:12
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