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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段基因连接,转化问题 已有4人参与

我想把一个6.5kb的片段倒入4.7kb的载体中,insert 是从一个质粒上切下来的,保证有相同的酶切位点,连接体系试过1:1,2:1, 3:1,热激,都不成功,已经做了快俩月了,求大神帮忙!

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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mmqlhy at 2017-03-23 01:40:12
有过两次假阳性,其余几次都是不长菌
...

我之前连过六千多的片段。我当时的载体是八千多,也是连了好久连不上,后来在片段中间找了个酶切位点,切下来。相当于三个东西一起连。终于做出来了。按照这个方法。一口气做出来四个这种克隆。你这个可以把比例换过来试试啊,毕竟你是片段大于载体。还有感受态的转化效率要高啊。

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14楼2017-03-23 15:06:10
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)

2楼2017-03-22 23:44:45
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)

是不长菌,还是都是假阳性?

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3楼2017-03-22 23:45:21
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-22 23:44:45
怎么个不成功法?

有过两次假阳性,其余几次都是不长菌

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4楼2017-03-23 01:40:12
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