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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌培养菌量太少
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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌培养菌量太少 已有2人参与

用的大肠杆菌是BL21,用LB培养基培养，在摇瓶发酵时到发酵结束OD600只有1，外源蛋白表达以包涵体形式存在，对菌体生长应该没有影响，观测ph变化是先下降到5左右，然后逐渐上升直8左右，感觉加入IPTG后就不长了，怎么办，求广大虫友帮忙。

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1楼 2017-03-15 09:55:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
开始诱导OD是多少？

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3楼2017-03-15 11:25:42
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渭城朝风

新虫 (初入文坛)
IPTG对菌体有毒性，你表达的蛋白可能也有毒性，且消耗大量氨基酸
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希望大家互相学习互相交流
4楼2017-03-15 13:38:33
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liudongxijun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先你要做一个BL21培养的生长曲线，根据生长曲线在对数期加入IPTG（0.1-0.6 mM），如果有包涵体最好是在16-20℃低温诱导，加入IPTG后，菌种本身就是不以生长为主，以蛋白表达为主，LB培养大肠，本身OD就不会太高。不要听他们说在OD 1.5时诱导，一定要在对数期（OD 0.6-0.8）诱导，因为本身LB摇瓶就是这样一个定性实验，先把酶表达出来再说。
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11楼2017-03-21 10:16:07
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普通回帖

小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
IPTG 是否过量了，有毒性可能影响生长的
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2楼2017-03-15 11:20:37
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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ganchao1776 at 2017-03-15 11:25:42
开始诱导OD是多少？

0.6多
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5楼2017-03-16 19:56:16
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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 渭城朝风 at 2017-03-15 13:38:33
IPTG对菌体有毒性，你表达的蛋白可能也有毒性，且消耗大量氨基酸

IPTG不是不被菌体利用吗？表达的蛋白以包涵体形式存在，应该不会危害菌体的吧
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6楼2017-03-16 19:57:36
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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小花木兰 at 2017-03-15 11:20:37
IPTG 是否过量了，有毒性可能影响生长的

之前做过IPTG诱导最佳表达量，选好了浓度，应该没有过量
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7楼2017-03-16 19:58:38
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 氺泽兮木兰 at 2017-03-16 19:56:16
0.6多

诱导早了，你等到1.5左右再诱导试试

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8楼2017-03-16 21:30:01
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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ganchao1776 at 2017-03-16 21:30:01
诱导早了，你等到1.5左右再诱导试试
...

但是不诱导，只测生长曲线时，发酵20h，od也约为1

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9楼2017-03-16 22:39:29
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
噢，那可能是培养基有问题吧！

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10楼2017-03-17 07:46:59
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