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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌培养菌量太少
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liudongxijun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先你要做一个BL21培养的生长曲线，根据生长曲线在对数期加入IPTG（0.1-0.6 mM），如果有包涵体最好是在16-20℃低温诱导，加入IPTG后，菌种本身就是不以生长为主，以蛋白表达为主，LB培养大肠，本身OD就不会太高。不要听他们说在OD 1.5时诱导，一定要在对数期（OD 0.6-0.8）诱导，因为本身LB摇瓶就是这样一个定性实验，先把酶表达出来再说。
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11楼2017-03-21 10:16:07
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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by liudongxijun at 2017-03-21 10:16:07
首先你要做一个BL21培养的生长曲线，根据生长曲线在对数期加入IPTG（0.1-0.6 mM），如果有包涵体最好是在16-20℃低温诱导，加入IPTG后，菌种本身就是不以生长为主，以蛋白表达为主，LB培养大肠，本身OD就不会太高。 ...

低温诱导是为了让菌多以可溶性蛋白表达吗？

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12楼2017-03-24 20:57:31
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我是骆驼

金虫 (正式写手)
诱导的有点早，菌主要产蛋白而不是生长  繁殖，所以，od低，菌少。

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多学习多交流
13楼2017-03-25 09:35:41
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