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重组质粒双酶切切不出片段 已有2人参与
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在构建一个重组质粒，载体再加上一个启动子（259bp），酶切用的是TAKARA 的Q.Cut Hind Ⅲ、PstⅠ，载体上有gfp基因片段，所以转化子可以表现荧光检测。 我挑取了发荧光的转化子，提质粒，酶切，但是没有切出来是怎么回事？  调过曝光还是看不见。 电泳图左→右，Marker 1kb Plus、plasmid、酶切1、酶切2、Marker DL 2000  酶切.png |
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原海亮
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-12 08:52:27
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你这是marker加多了还是曝光度没有调好额，条带都看不清楚，你这个载体空载的时候，gfp前面有启动子么？还是是专门检测启动子的载体？可以重新做个酶切降低些质粒量，或者再选择其他的酶试试。另外可以用启动子的特异性引物或者通用引物，用质粒做模板做个PCR验证看看。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-03-11 22:29:27
小冀-
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2楼2017-03-11 12:25:06
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是曝光度大，为了找小片段； 空载体做了阳性对照并不会产生GFP，所以应该是没有自身携带启动子； 很尴尬的是启动子前面只有一个酶切位点Hind3，所以要换两种酶这个想法做不了； PCR的结果是有目的条带的T^T 我现在只能想是酶切位点变异，先去测序看看了 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-03-11 23:18:49
5楼2017-03-11 23:20:35