| 查看: 2041 | 回复: 11 | ||
[求助]
重组质粒双酶切切不出片段 已有2人参与
|
||
|
在构建一个重组质粒，载体再加上一个启动子（259bp），酶切用的是TAKARA 的Q.Cut Hind Ⅲ、PstⅠ，载体上有gfp基因片段，所以转化子可以表现荧光检测。 我挑取了发荧光的转化子，提质粒，酶切，但是没有切出来是怎么回事？  调过曝光还是看不见。 电泳图左→右，Marker 1kb Plus、plasmid、酶切1、酶切2、Marker DL 2000  酶切.png |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有98人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Bgl2和Hind3双酶切切不开
已经有12人回复
- 重组质粒双酶切
已经有7人回复
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-12 08:52:27
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-12 08:52:27
|
你这是marker加多了还是曝光度没有调好额，条带都看不清楚，你这个载体空载的时候，gfp前面有启动子么？还是是专门检测启动子的载体？可以重新做个酶切降低些质粒量，或者再选择其他的酶试试。另外可以用启动子的特异性引物或者通用引物，用质粒做模板做个PCR验证看看。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-03-11 22:29:27
小冀-
版主 (著名写手)
- 应助: 713 (博后)
- 贵宾: 3.033
- 金币: 11446.9
- 散金: 1055
- 红花: 82
- 帖子: 2509
- 在线: 445.9小时
- 虫号: 1521695
- 注册: 2011-12-03
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-13 07:44:50
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-13 07:44:50
|
那可能连的东西和你想要的根本就不是一回事，你可以测个序看看，估计不对 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-03-11 23:22:14
小冀-
版主 (著名写手)
- 应助: 713 (博后)
- 贵宾: 3.033
- 金币: 11446.9
- 散金: 1055
- 红花: 82
- 帖子: 2509
- 在线: 445.9小时
- 虫号: 1521695
- 注册: 2011-12-03
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 微生物
2楼2017-03-11 12:25:06
|
是曝光度大，为了找小片段； 空载体做了阳性对照并不会产生GFP，所以应该是没有自身携带启动子； 很尴尬的是启动子前面只有一个酶切位点Hind3，所以要换两种酶这个想法做不了； PCR的结果是有目的条带的T^T 我现在只能想是酶切位点变异，先去测序看看了 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-03-11 23:18:49
5楼2017-03-11 23:20:35
7楼2017-03-11 23:27:30
8楼2017-03-11 23:27:57
小冀-
版主 (著名写手)
- 应助: 713 (博后)
- 贵宾: 3.033
- 金币: 11446.9
- 散金: 1055
- 红花: 82
- 帖子: 2509
- 在线: 445.9小时
- 虫号: 1521695
- 注册: 2011-12-03
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 微生物
9楼2017-03-11 23:29:38
10楼2017-03-13 00:53:26
