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ywc193x

金虫 (正式写手)

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[求助] elisa反应异常已有5人参与

大家好，最近做实验有如下现象，麻烦各位解惑！

   实验一：我做elisa实验，包被蛋白A，用抗A的鼠单抗与之反应，再用酶标二抗反应，最后显色，证明蛋白A和抗A抗体能反应；

   实验二：我包被蛋白A，用蛋白A（3个浓度梯度，最高的和包被浓度一样）和抗A的鼠单抗一同加入到微孔中反应，再用酶标二抗反应，最后显色，结果发现没发生竞争反应，不知道原因？？

   实验三：我更换反应buffer（5.0、6.0、7.4、8.5、9.0），重复实验二，结果也是一样不发生竞争反应。

   请问各位有没有碰到同样的情况，怎么解决啊？？

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爱生活爱自己

1楼 2017-02-21 16:12:07

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ywc193x

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by ledah at 2017-02-22 17:09:46
我觉得你的一抗还是比较高，你可以试试包被一抗，用蛋白A孵育结合30min，再加二抗显色，对比看一下蛋白A有没有起到遮挡一抗的作用。。再有就是，完整抗体一般是二价的，你这个竞争实验可以先让一抗和蛋白A在无蛋白包 ...

谢谢您的回复！
首先：（我觉得你的一抗还是比较高，你可以试试包被一抗，用蛋白A孵育结合30min，再加二抗显色，对比看一下蛋白A有没有起到遮挡一抗的作用）二抗的结合位点和蛋白的结合位点不一样，这个能遮蔽吗？

（完整抗体一般是二价的，你这个竞争实验可以先让一抗和蛋白A在无蛋白包被的封闭板中孵育10min再转入包被板中试试。）抗体是二价的，但游离的蛋白比包被在膜上的蛋白更容易和抗体反应啊，这么高的游离蛋白都不发生竞争反应应该不是这个原有把