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ywc193x

金虫 (正式写手)

[求助] elisa反应异常 已有5人参与

大家好,最近做实验有如下现象,麻烦各位解惑!
            
       实验一: 我做elisa实验,包被蛋白A,用抗A的鼠单抗与之反应,再用酶标二抗反应,最后显色,证明蛋白A和抗A抗体能反应;

       实验二:我包被蛋白A,用蛋白A(3个浓度梯度,最高的和包被浓度一样)和抗A的鼠单抗一同加入到微孔中反应,再用酶标二抗反应,最后显色,结果发现没发生竞争反应,不知道原因??

       实验三:我更换反应buffer(5.0、6.0、7.4、8.5、9.0),重复实验二,结果也是一样不发生竞争反应。
         
       请问各位有没有碰到同样的情况,怎么解决啊??
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爱生活爱自己
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ledah

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ywc193x: 金币+6, ★★★很有帮助 2017-02-28 10:19:56
我觉得你的一抗还是比较高,你可以试试包被一抗,用蛋白A孵育结合30min,再加二抗显色,对比看一下蛋白A有没有起到遮挡一抗的作用。。再有就是,完整抗体一般是二价的,你这个竞争实验可以先让一抗和蛋白A在无蛋白包被的封闭板中孵育10min再转入包被板中试试。
6楼2017-02-22 17:09:46
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夏滋味8858

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是还要摸条件呢,间接ELISA和竞争ELISA条件应该不同要再摸吧,你的对照呢?是怎么设置的
2楼2017-02-21 22:27:54
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ywc193x

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 夏滋味8858 at 2017-02-21 22:27:54
是不是还要摸条件呢,间接ELISA和竞争ELISA条件应该不同要再摸吧,你的对照呢?是怎么设置的

我调整了,一点竞争也没有,比较奇怪(一抗浓度不高,显色1.0)
爱生活爱自己
3楼2017-02-22 09:08:24
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深山在我家

禁虫 (正式写手)

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4楼2017-02-22 09:20:48
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