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黄崇

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 10
帖子: 1
在线: 4小时
虫号: 1697229
注册: 2012-03-17
专业: 抗体工程学

[求助] Elisa抗原异常情况探讨

请教下大家，是否遇到过这种问题，用抗原（重组蛋白）做标曲，试剂盒为双抗夹心法，在抗体对无误的前提下，抗原做梯度，从5ug-62pg，在25ng前，信号都为最大值，而在下一个稀释梯度（10ng)，信号变为阴性，同时原装的标曲，阴阳质控无误，但，单纯加入PBS作为抗原，反应，OD能达到0.5.——大家觉得造成这样的可能有哪些？

我的猜想：1.抗原的序列是错的
               2.结合PBS，有0.5信号，抗原体系也为PBS，是否更换体系，能有所改变
期待大家的猜想和推断。

实验数据简图
20150902    20150908
1 5ug          ( + )          ( + )
2 1ug          ( + ) ( + )
3 100ng ( + )          ( + )
4 10ng 0.181 1.82
5 1ng          0.168    0.155
6 500pg 0.089 0.105
7 250pg 0.088 0.088
8 125pg 0.088 0.083
9 62.5pg 0.09          0.076
10 标准品A 0.083 0.072
11 标准品B 0.13       0.101
12 标准品C 0.195 0.154
13 标准品D 0.317 0.249
14 标准品E 0.726 0.63
15 标准品F 1.148 0.751
16 标准品G 1.469 1.194
17 阳性质控 1.004 0.752
18 阴性质控 0.171 0.133
19 蒸馏水 0.271 0.203
20 蒸馏水 0.283 0.23
21 PBS       0.152          0.495
22 PBS       0.147          0.47
23 空白       0.155          0.131
24 空白          0.147    0.128
其中1-9为自制抗原，稀释，数字浓度单位为XX/ml
1000ng ( + )
100ng ( + )
75ng ( + )
50ng ( + )
25ng ( + )
0          0.06
阳性对照 0.476
阴性对照 0.102
此数据同为抗原梯度稀释。

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