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关于诱导表达问题 已有6人参与
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重组菌诱导表达后跑蛋白电泳，结果如下图。从左到右依次为maker、重组菌上清、重组菌沉淀、空菌上清和沉淀 重组载体为bl-21-pet-28a，带his-tag，诱导温度为16度，时间16小时左右 用16度诱导是看别人说低温诱导有助于蛋白的正确折叠，可是我这怎么全是包涵体 希望有人能帮我解惑！！！！！！！！！！！！  H5`P@E1P4E2C}GL@ZV$%R%B.png |
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lialee22
木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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xn8008: MolEPI+1 2017-02-18 01:08:57
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-02-18 01:09:10
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如果实验室通用的条件做出来效果好，那就用这个条件。 如果做不出来，那么，诱导表达的所有条件都需要自己去摸索。包括但不限于诱导温度、IPTG浓度、转速。 实验室中别人的IPTG浓度0.2mM做得很好，但对于你的菌来说可能还是太高了。 如果不做正交的话，还是挺简单的。 我当初一开始也是按照前人的条件做，别人就结果很好，可我就是包涵体。最后经过摸索后，我的诱导温度、IPTG浓度都比其他人的小很多。 总之就是让它表达慢一点。不过这样的话要求你目的酶活性要高，不然量太少，后面没法做。 祝福楼主顺利~~~~~~~ |
18楼2017-02-16 10:03:10
seascen2016
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2楼2017-02-14 16:11:25
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