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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于诱导表达问题
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新虫 (初入文坛)

[求助] 关于诱导表达问题 已有6人参与

重组菌诱导表达后跑蛋白电泳，结果如下图。从左到右依次为maker、重组菌上清、重组菌沉淀、空菌上清和沉淀
重组载体为bl-21-pet-28a，带his-tag，诱导温度为16度，时间16小时左右
用16度诱导是看别人说低温诱导有助于蛋白的正确折叠，可是我这怎么全是包涵体
希望有人能帮我解惑！！！！！！！！！！！！

关于诱导表达问题
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1楼 2017-02-14 13:10:05
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lialee22

木虫 (著名写手)

黑钻会员

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: MolEPI+1 2017-02-18 01:08:57
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-02-18 01:09:10
如果实验室通用的条件做出来效果好，那就用这个条件。
如果做不出来，那么，诱导表达的所有条件都需要自己去摸索。包括但不限于诱导温度、IPTG浓度、转速。
实验室中别人的IPTG浓度0.2mM做得很好，但对于你的菌来说可能还是太高了。
如果不做正交的话，还是挺简单的。
我当初一开始也是按照前人的条件做，别人就结果很好，可我就是包涵体。最后经过摸索后，我的诱导温度、IPTG浓度都比其他人的小很多。
总之就是让它表达慢一点。不过这样的话要求你目的酶活性要高，不然量太少，后面没法做。

祝福楼主顺利~~~~~~~
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诸事顺遂
18楼2017-02-16 10:03:10
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查看全部 22 个回答

seascen2016

新虫 (小有名气)
这个跟蛋白本身性质有关，有的就容易产生包涵体，楼主可以试试少加点诱导剂再试试

发自小木虫Android客户端
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2楼2017-02-14 16:11:25
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栾栾silence

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-15 07:52:41
并不是所有的原核表达蛋白都会分泌表达的，有的就是会形成包涵体，看到你的上清中其实也含有一点目的蛋白，你可以将菌体多超声，多裂解，使其充分裂解，然后只要上清中的目的蛋白，也可以就这样按照包涵体蛋白的提取方法来做。
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怀挺！
3楼2017-02-14 16:28:56
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新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 栾栾silence at 2017-02-14 16:28:56
并不是所有的原核表达蛋白都会分泌表达的，有的就是会形成包涵体，看到你的上清中其实也含有一点目的蛋白，你可以将菌体多超声，多裂解，使其充分裂解，然后只要上清中的目的蛋白，也可以就这样按照包涵体蛋白的提取 ...

超声时间过长不是会使蛋白变性吗？这样不会影响酶活性的测定吗
赞一下 回复此楼
4楼2017-02-14 16:45:35
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查看全部 22 个回答
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