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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组载体构建问题，载体双酶切老切不开。
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清嗓金声

铜虫 (初入文坛)
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重组载体构建问题，载体双酶切老切不开。
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本人构建重组载体,两个酶切位点之间有8bp，有共用buffer可以一块切，一块切过夜，两个酶分开切过夜都试过，液体回收回来跑胶，和未切的质粒做对照，双酶切的明显跑得慢。这个可以说明载体切开了吗？和我的目的片段重组总是假阳性多，平板长满克隆。载体和片段比例问题也按照说明算过加的。之前菌落鉴定过也确实没条带。求助各位大神！！眼看植物一天天长大要侵染了。

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1楼 2017-02-14 11:24:58
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a509893600

铜虫 (小有名气)
看看

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5楼2017-02-14 11:25:58
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star013

新虫 (知名作家)
★
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我们公司可以提供载体构建技术服务

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6楼2017-02-14 13:19:18
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seascen2016

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用的是什么酶，有的酶酶切需要保护碱基的，要先切。

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7楼2017-02-14 16:07:00
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seascen2016

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还有你片段很载体分别多大，可以把片段多加一些。酶切2-个小时就足够了，有时候过夜酶切容易产生星号活性，反而不好

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8楼2017-02-14 16:09:05
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
两个酶切位点间距太小，基本很难两个都切开。换个酶吧。

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9楼2017-02-15 13:01:13
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清嗓金声

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by seascen2016 at 2017-02-14 16:07:00
用的是什么酶，有的酶酶切需要保护碱基的，要先切。

这个考虑到了

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10楼2017-02-27 08:57:16
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郭帅楠2楼
2017-02-14 11:25   回复  
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酒进鹤3楼
2017-02-14 11:25   回复  
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uonh4楼
2017-02-14 11:25   回复  
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