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momimiao

新虫 (初入文坛)

[交流] pcr扩不出来 怀疑模板问题 求助 已有19人参与

用试剂盒提取的DNA进行pcr扩不出来 怀疑是模板问题 尝试多加一点DNA还是不行 可能DNA里有抑制作用 现在打算减少模板量来试一试 但是DNA浓度测出来很低 最低的4ng/ul 想知道DNA模板最少的用量是多少啊
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╮(╯_╰)╭
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后来银河

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
4ng差不多就算是没有提出来了

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9楼2017-01-16 10:10:51
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momimiao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 山威研发 at 2017-01-15 20:26:55
怎么不做菌液PCR,4ng太低了。可以说是误差引起的,没有模板DNA,所以P不出。

因为做的就是沉积物样品啊_(:зゝ∠)_  试着把DNA加到了3微升 还是不行 不知道是不是模板不纯的原因
╮(╯_╰)╭
3楼2017-01-15 20:40:00
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山威研发

新虫 (初入文坛)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-16 08:07:39
怎么不做菌液PCR,4ng太低了。可以说是误差引起的,没有模板DNA,所以P不出。

发自小木虫Android客户端
2楼2017-01-15 20:26:55
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muncheng

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物有没有问题啊,反应体系再检查检查

发自小木虫Android客户端
4楼2017-01-15 22:19:08
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西西sm

新虫 (正式写手)

5楼2017-01-15 23:15:09
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kunkuncow

新虫 (小有名气)

方式分额
6楼2017-01-16 00:14:09
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cry_2013

木虫 (正式写手)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-21 06:46:10
一个是确定模板质量,二是确定引物没问题,感觉引物对PCR的扩增影响很大,引物对了,退火问题有波动也能扩出来
7楼2017-01-16 09:50:43
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妞—潇洒

新虫 (正式写手)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-21 06:46:46
引物的问题吧 引物好用的话 即使模版浓度在ng的下一个数量级都一样能P出来 其实浓度对扩增的影响不大的

发自小木虫IOS客户端
我只管面朝大海,龇牙咧嘴,至于花爱开不开
8楼2017-01-16 09:55:53
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momimiao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by muncheng at 2017-01-15 22:19:08
引物有没有问题啊,反应体系再检查检查

引物是公司提供的 有的样品做出来了 有的没做出来 所以怀疑是不是模板的问题
╮(╯_╰)╭
10楼2017-01-16 18:39:16
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