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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr扩不出来 怀疑模板问题 求助
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momimiao

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 后来银河 at 2017-01-16 10:10:51
4ng差不多就算是没有提出来了

4ng是最低的 往上到十几ng都有
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11楼2017-01-16 18:40:43
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momimiao

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by 妞—潇洒 at 2017-01-16 09:55:53
引物的问题吧 引物好用的话 即使模版浓度在ng的下一个数量级都一样能P出来 其实浓度对扩增的影响不大的

引物是公司提供的 用的都是524/958 然后有的样品做出来了 有的没做出来 所以怀疑是不是模板的问题
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12楼2017-01-16 18:41:49
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momimiao

新虫 (初入文坛)
一直都是跑的一个程序 引物是测序那边提供的 但是这批样品提取的DNA浓度很低 260/280很高 不知道怎么回事 感觉就是模板的问题 现在只能尽量看看能不能扩出来  不知道有没有什么办法抢救一下_(:зゝ∠)_
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13楼2017-01-16 20:53:37
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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)
★
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质粒或者病毒DNA这个模板量是可以的，但是要是基因组DNA的话就太少了，很难扩得出来
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14楼2017-01-17 14:13:41
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许彦

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也怀疑是模板的问题。如果有些可以扩出来的话。

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15楼2017-01-17 16:35:02
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momimiao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 浮笙若梦 at 2017-01-17 14:13:41
质粒或者病毒DNA这个模板量是可以的，但是要是基因组DNA的话就太少了，很难扩得出来

我查了一些资料 有的说10-25ng就可以 但是还是扩不出来_(:зゝ∠)_
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16楼2017-01-17 18:48:52
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momimiao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 许彦 at 2017-01-17 16:35:02
我也怀疑是模板的问题。如果有些可以扩出来的话。

因为方法和试剂都是一直在用的 排除来看就剩引物和模板了 引物不能换 就只能从模板上找 浓度低纯度也低 不知道有没有什么办法可解决
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17楼2017-01-17 18:50:58
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m_bliss

银虫 (初入文坛)
★
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DNA没有提出来，试剂盒可能有问题

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18楼2017-01-17 19:17:58
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静默人声412

木虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by momimiao at 2017-01-15 20:40:00
因为做的就是沉积物样品啊_(:зゝ∠)_  试着把DNA加到了3微升 还是不行 不知道是不是模板不纯的原因...

加10ul ，50体系的。我提的土壤都。

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19楼2017-01-17 19:34:53
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太阳的电子

新虫 (小有名气)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-21 06:46:32
你的实验设计有问题啊，找个质量比较好的dna样品一起上机作为阳性对照，这样就能清楚是样品问题还是体系问题了

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20楼2017-01-17 19:45:05
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