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upwardkl新虫 (初入文坛)
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LB平板培养大肠杆菌，不长菌，或零星几个 已有5人参与
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近一个多月以来，自制的感受态细胞（Top10和DH5&）,测OD600值，均为0.5左右， 后将T-A克隆的产物做转化，使用的平板为LB固体平板，平板涂布，37度培养，至少要等14-16h后，才能看到零星的菌，且特小，有时候甚至没有菌，， 寻求原因和实验指导和帮助！ 谢谢！ |
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2017-03-05 08:54:53
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可以试着测以下感受态的效价，或者直接买个感受态，我用的是诺维赞家的，价格便宜，用的也不错 感受态测效价方法是：转1ng高质量的质粒到100μl感受态中 ——> 按克隆转化流程：冰上静置、热激、冰冷、补培养基、摇菌 ——> 取1/10涂板，培养过夜 ——> 长1000个单菌落，效价为10^7 举例子： 假设取0.1ng pUC19质粒转入100μl待测的感受态细菌中，按常规转化步骤进行冰浴和热击，加入900μlSOC培养基继续培养（此时DNA浓度为0.1ng DNA/ml，这里也可使用LB培养基，但最后得到的克隆菌的数目可能会降低）。然后再用SOC培养基进行1:10稀释（此时DNA浓度变为0.01ng DNA/ml），分别取100μl（含总量为0.001ng的DNA）涂布至两个平行的平板中。如果最后产生的菌落数为200 个（两个平板菌落的平均数），则转化效率为： 200 cfu/0.001ng = 2×10^8 cfu/μg |
7楼2017-01-11 10:34:27
wskisaac
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建议先从公司买商业感受态，以此为基础做自己感受态。OD最好0.3-0.4最好。先阳转质粒试试，别先做克隆。 发自小木虫IOS客户端 |
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upwardkl9楼2017-01-11 15:52:07
2楼2017-01-10 16:09:36
4楼2017-01-10 21:29:16
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wskisaac
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3楼2017-01-10 20:37:23
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