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新虫 (初入文坛)

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虫号: 3101077
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专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] LB平板培养大肠杆菌，不长菌，或零星几个已有5人参与

近一个多月以来，自制的感受态细胞（Top10和DH5&）,测OD600值，均为0.5左右，

后将T-A克隆的产物做转化，使用的平板为LB固体平板，平板涂布，37度培养，至少要等14-16h后，才能看到零星的菌，且特小，有时候甚至没有菌，，

寻求原因和实验指导和帮助！
谢谢！

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雪霁花开，向上追求

1楼2017-01-10 14:52:03

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月夜听雨0323

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2017-03-05 08:54:53

可以试着测以下感受态的效价，或者直接买个感受态，我用的是诺维赞家的，价格便宜，用的也不错
感受态测效价方法是：转1ng高质量的质粒到100μl感受态中 ——> 按克隆转化流程：冰上静置、热激、冰冷、补培养基、摇菌
——> 取1/10涂板，培养过夜 ——> 长1000个单菌落，效价为10^7
举例子：
假设取0.1ng pUC19质粒转入100μl待测的感受态细菌中，按常规转化步骤进行冰浴和热击，加入900μlSOC培养基继续培养（此时DNA浓度为0.1ng DNA/ml，这里也可使用LB培养基，但最后得到的克隆菌的数目可能会降低）。然后再用SOC培养基进行1:10稀释（此时DNA浓度变为0.01ng DNA/ml），分别取100μl（含总量为0.001ng的DNA）涂布至两个平行的平板中。如果最后产生的菌落数为200 个（两个平板菌落的平均数），则转化效率为：
200 cfu/0.001ng = 2×10^8 cfu/μg