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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 稳定表达亚细胞定位
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逗逼庄庄

新虫 (初入文坛)

[求助] 稳定表达亚细胞定位 已有1人参与

我的基因大概有3000+，用的是gateway技术构建了一个带egfp的融合载体，35s-cds-egfp。该载体已经转化栽培种烟草，在dna,rna水平上都验证阳性的植物，去观察gfp荧光，结果什么都看不到，也做过瞬间表达本氏烟草，也是没有荧光，试了两个不同的gfp融合载体，个一个yfp融合载体，都是没有荧光。请问这是怎么回事？该如何解决这种问题。

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1楼 2017-01-01 10:47:41
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-01 21:59:37
1 检查序列是否正确
2 考虑蛋白结构，是否荧光蛋白应该连在另外一端
3 准备一个阳性对照，看看侵染以后是否有荧光

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2017-01-01 16:35:10
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逗逼庄庄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2017-01-01 16:35:10
1 检查序列是否正确
2 考虑蛋白结构，是否荧光蛋白应该连在另外一端
3 准备一个阳性对照，看看侵染以后是否有荧光

序列测序都正确，也能翻译成氨基酸，别人跟我用同一个载体，同时做，他的有荧光，现在在尝试构建35s-gfp-cds,试一下

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3楼2017-01-02 13:01:40
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lovmol

新虫 (小有名气)
叶绿体自发荧光能看到吗？

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4楼2017-01-02 13:10:51
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)
首先是目的基因后的终止密码子有没有去掉，读码框是否发生了改变，再者就要考虑你的基因可能不表达。
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5楼2017-02-10 09:09:48
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以提供亚细胞定位技术服务

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6楼2017-02-10 17:54:28
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逗逼庄庄

新虫 (初入文坛)
1 @starseacow

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7楼2017-02-10 17:59:21
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djt12345

新虫 (初入文坛)
验证基因是否表达只能做western吗

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8楼2017-02-27 20:53:16
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djt12345

新虫 (初入文坛)
我也有个基因一直没有荧光

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9楼2017-02-27 20:53:45
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