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逗逼庄庄

新虫 (初入文坛)

[求助] 稳定表达亚细胞定位 已有1人参与

我的基因大概有3000+,用的是gateway技术构建了一个带egfp的融合载体,35s-cds-egfp。该载体已经转化栽培种烟草,在dna,rna水平上都验证阳性的植物,去观察gfp荧光,结果什么都看不到,也做过瞬间表达本氏烟草,也是没有荧光,试了两个不同的gfp融合载体,个一个yfp融合载体,都是没有荧光。请问这是怎么回事?该如何解决这种问题。

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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-01 21:59:37
1 检查序列是否正确
2 考虑蛋白结构,是否荧光蛋白应该连在另外一端
3 准备一个阳性对照,看看侵染以后是否有荧光

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2017-01-01 16:35:10
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逗逼庄庄

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2017-01-01 16:35:10
1 检查序列是否正确
2 考虑蛋白结构,是否荧光蛋白应该连在另外一端
3 准备一个阳性对照,看看侵染以后是否有荧光

序列测序都正确,也能翻译成氨基酸,别人跟我用同一个载体,同时做,他的有荧光,现在在尝试构建35s-gfp-cds,试一下

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3楼2017-01-02 13:01:40
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lovmol

新虫 (小有名气)

叶绿体自发荧光能看到吗?

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4楼2017-01-02 13:10:51
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)

首先是目的基因后的终止密码子有没有去掉,读码框是否发生了改变,再者就要考虑你的基因可能不表达。
5楼2017-02-10 09:09:48
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star013

新虫 (知名作家)


我们可以提供亚细胞定位技术服务

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6楼2017-02-10 17:54:28
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逗逼庄庄

新虫 (初入文坛)

7楼2017-02-10 17:59:21
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djt12345

新虫 (初入文坛)

验证基因是否表达只能做western吗

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8楼2017-02-27 20:53:16
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djt12345

新虫 (初入文坛)

我也有个基因一直没有荧光

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9楼2017-02-27 20:53:45
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