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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)

[求助] Western blot目的条带上有竖着的杂带 已有1人参与

如图所示第一行的条带,有竖着的杂带,请问是什么原因导致的?第一张的图的第一行条带和第二张图的第一行条带,是不同小鼠的同一种组织样本,上样量差不多都是20几微克,还有一点就是一个是十孔一个15孔胶,我想问是什么原因导致的带型差异较大,第一个比较清晰,第二个比较杂乱,是提蛋白样品的原因?还是跟多少孔胶有关系?

Western blot目的条带上有竖着的杂带


Western blot目的条带上有竖着的杂带-1


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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你这个应该算是跑胶拖尾现象,原因其实挺多,需要你分析一下你这个属于哪种情况。1. 蛋白浓度测定不准,导致上样量过大,可以降低上样量看看,改为15μg上样 2 电压过高,导致跑胶过快,温度过高也是同理,会导致拖尾  3 蛋白要充分变性然后上样  4 蛋白上样要充分离心,然后取上清上样,如果混有杂质,也会导致蛋白出现拖尾现象。你可以尝试从这几个方面找找,看看是不是哪里没有注意到,这些原因也仅供你参考,其深层的原因还需要你自己去分析。
2楼2016-12-30 08:39:00
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star013

新虫 (知名作家)


3楼2016-12-30 09:27:44
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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-30 08:39:00
你这个应该算是跑胶拖尾现象,原因其实挺多,需要你分析一下你这个属于哪种情况。1. 蛋白浓度测定不准,导致上样量过大,可以降低上样量看看,改为15μg上样 2 电压过高,导致跑胶过快,温度过高也是同理,会导致拖 ...

下面的条带都是同样的样本,只是不同的抗体,只有最上面的那个抗体才会出现这种拖带的现象。

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4楼2016-12-30 10:18:16
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东村以东

新虫 (初入文坛)

你好,请问你找到原因了吗?我也有同样的问题,一张膜上就一个蛋白出现孔两边长长的拖带。怀疑是这个蛋白可以和某种不同大小碎片的东西结合了。你做的什么蛋白?

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5楼2017-03-23 20:00:17
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fuyue6521

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

6楼2017-04-19 13:34:38
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